LabSolutionHPLC自动进样器的技术原理.PDF

LabSolution HPLC 自动进样器的技术原理 现在大部分色谱工作者每天都在使用自动进样器（AutoSampler ）。自动进样器可以减少体力劳动，增 加样品处理量，提高日常工作精度。本文介绍了三种常见的自动进样器设计，包括它们的工作原理以及各 自的优缺点。 进样阀(Injection Valves) 多数自动进样器用六通进样阀作为进样阀，它包括圆形密封垫（转子）和固定底座（定子）两部分。 定子连接到管路、样品环、进样孔以及其他外围部件，一般是用不锈钢或者陶瓷等耐磨材料制造。转子和 定子紧密结合，操作时可以转动，一般用较定子柔软的材料制成，如碳氟聚合物。自动进样器的转子是通 过电动马达带动的（有一些较老的型号使用压缩空气带动），而手动进样器则是在转子上连了一个手柄。 转子包括一些细小的刻槽用于连接到不同的定子位置。在图中可以看到，定子和相关的连接在表示阀体的 圆圈以外，而转子的U 形的连接通道被画在圆圈以内。图1 是一个典型的进样阀结构示意，a 表示转子处 于 load 或fill 位置，这时样品正在充入样品环，同时泵直接将流动相送入色谱柱；b 表示转子转至 inject 位置，连接泵的通路和样品环连接，流动相将其中的样品冲入色谱柱。 图1 六通阀示意图 a:load b:inject 箭头表示流向 完全装液法和部分装液法进样(Filled- and Partial-Loop Injection) 一般的六通进样阀都可以用完全装液或部分装液的方式进样。使用完全装液法(Filled-Loop)时进样体 积取决于样品环的体积，图2a 是这种方法的示意。例如，阀上装了20ul 的样品环，样品被注入环中直到 多余的样品从废液口排出，当转子转到inject 位置时样品环中的样品就进入柱子。由于流体动力学的原因， 分析者至少需要注入两倍于样品环体积的样品才能得到均匀的填充。如果要改变进样体积，就需要换上另 一个不同体积的样品环。 图2 完全装液法和部分装液法示意图 电话：0754-8895211 8879352 传真：0754-8831190 第1/4 页 汕头市科毅仪器设备有限公司 LabSolution 另一种技术称之为部分装液法(Partial-Loop)，示意图见图2b，即将一定精确量的样品注入样品环中。 例如，100ul 样品环中可以只进20ul 样品，然后，转子转动，样品被流动相冲入柱中。对于大多数进样器 最好能控制进样量少于样品环体积的一半。相对于完全装液法来说，这种技术的灵活性更高，因为分析者 不需要更换样品环就可以进不同体积的样品。但这种技术需要进样器的取样体积有良好的精度和准度。 你是否注意到样品是被“反冲” （backflush）进入柱子的？实际上样品从一个方向进入样品环，然后从 相反的方向冲出样品环。反冲对于完全装液法的结果没有影响，但对部分装液法就非常重要了。考虑到有 的自动进样器可能装了很大体积的样品环（比如1ml），如果分析者在1ml 样品环中加入10ul 样品，反冲 进入柱，则样品就会以“液塞”的形式和样品环中其他物质（流动相）一起直接进入柱，这样就能得到良好 的色谱结果；如果情况相反的话（图2b 中泵和色谱柱互换位置），10ul 的样品塞不得不流过1ml 的管路， 这会造成样品带展宽，已经展宽的样品在分离过程中会进一步展宽，谱图中所有峰均会比预期的宽，等度 分离时情况会更糟。因此反冲技术是很重要的进样技术。 手动进样器的工作方式就像图1 和2 中描述的，样品用进样针注入，转子用手转（或按下Inject 键）。 多数自动进样器设计是基于下列三种原理之一，样品被吸/推入样品环中或者进样针就是样品环的一部分。 A. 吸入式自动进样器 (Pull-to-Fill Autosampler) 这种自动进样器中样品是被注射器产生的吸力吸入样品环，早期这种设计因其简单可靠而非常流行， 后来随着另两种设计的出现而走向没落。图 3a 是其示意，此例中注射器连在废液排出口，采样针和相应 的管路连在进样口，针插入样品瓶中，接着注射器回吸直到样品完全充满样品环，转子旋转将样品进样