基因表达检测课件.pptVIP

第三部分：基因表达检测;基因表达检测的应用范畴;基因表达检测的技术手段;RT-PCR (qRT-PCR) ; mRNA 反转录生成的cDNA可作为PCR的模板进行扩增称为RT-PCR； RT-PCR比Northern杂交更灵敏，对RNA的质量要求较低，操作简便，它是在转录水平上检测基因时空表达的常用方法。;总RNA 提取;RNA酶抑制剂;实验目的：学习RNA的简易制备过程，通过RNA电泳 带评价RNA质量 实验材料：水稻幼嫩叶片 ;苯酚/氯仿反复抽提 ，价廉但质不优，尤其是对多酚等含量高的材料不适 蛋白酶/SDS配合酚、氯仿抽提的方法 强变性剂法。硫氰酸胍，盐酸胍等，可 配合氯化铯离心或有机溶剂提取。 Trizol Reagent;利用Trizol试剂抽提植物总RNA原理;75％乙醇（in DEPC-treated water) 氯仿、异丙醇（RNA专用） RNase-free water：Draw water to RNase-free glass bottles. Add diethylpyrocarbonate （DEPC）to 0.1% . Let stand overnight and autoclave. 防止外源RNase的污染： 应戴口罩和手套，环境洁净； 玻璃器皿180oC烘烤3 hrs以上；