万特普安在膀胱癌中的抑癌效应及分子机制分析-analysis of the anti-cancer effect and molecular mechanism of venturam in bladder cancer.docx

华中科技大学博士学位论文 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 英文缩写一览表 主要缩略词表 CCK DAB EDTA EGFR Cell Counting Kit Diaminodiphenyl benzidine Ethylendiaminotetraacetic acid Epithelial growth factor receptor 细胞计数试剂盒 二氨基联苯 乙二胺四乙酸 表皮生长因子受体 EMT epithelial- mesenchymal transition 上皮间充质转化 ERK extracellular regulated protein kinases 细胞外调解蛋白激酶 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 FCM Flow cytometry 流式细胞术 HER human epidermal growth factor receptor 人表皮生长因子受体 FITC Fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 h hour 小时 IC50 half maximal inhibitory concentration 半数抑制浓度 L Litre 升 LB Lysogeny broth 溶菌肉汤 min Minute 分钟 ml Millilitre 毫升 MMP matrix metalloproteinase 基质金属蛋白酶 MSHA mannose sensitive hemagglutinin 甘露糖敏感血球凝集素 PA Pseudomonas aeruginosa 铜绿假单胞菌 PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PA-MSHA Pseudomonas aeruginosa-mannose sensitive hemagglutinin 万特普安 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PI propidine iodide 碘化丙啶 PS Phosphatidylserine 磷脂酰丝氨酸 PVDF Polyvinylidene fluoride 聚偏二氟乙烯 rpm Revolutions per minute 转 / 分钟 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基磺酸钠 TBS Tris-buffered saline Tris 缓冲液 TBST TBS with Tween 20 含 Tween 20 的 Tris 缓 冲液 TdT Terminal Deoxynucleotidyl Transferase TEMED N,N,N’,N’-Tetramethylethylenedia mine Tris Tris(hydroxymethyl) aminomethane 末端脱氧核苷酸转移酶 N,N,N’,N’-四甲基二 乙胺 三羟甲基氨基甲烷 TUNEL TdT-mediated dUTP nick end TdT 介导的 dUTP 缺口 labeling 末端标记技术 中 文 摘 要 万特普安在膀胱癌中的抑癌效应及分子机制研究 博士研究生 昌 磊 导 师 庄乾元教授 华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科 背景及目的 万特普安（铜绿假单胞菌注射液）是一种含有甘露糖敏感血球凝集素菌毛 （MSHA）的铜绿假单胞菌（PA），可以识别并结合细胞表面的甘露糖受体，抑 制肿瘤细胞上 EGFR 受体的活化，进而抑制肿瘤细胞。目前已有研究证明对肺癌、 肝癌、胃癌、结直肠癌、乳腺癌等在内的肿瘤具有明显的抗癌作用。但是该药对 膀胱癌是否具有抗癌效应，仍然没有有效的证据支持。因此本实验研究主要探讨 万特普安（PA-MSHA）对膀胱癌在体外及体内的抗癌活性及其主要机制。 方法 1、 选取正常尿路上皮 细胞系 (SV-HUC-1) 和三种膀胱癌细胞 系 （T24,5637,HT-1376）,分别经不同浓度 PA-MSHA 处理 24h,48h,72h 后，通过 CCK-8 检测法检测药物对细胞增殖能力的影响。 2、 通过透射电镜观察 PA-MSHA 处理 24h 后膀胱癌细胞超微结构的改变。 3、 流式细胞术（FCM）检测不同浓度药物处理 24h 后膀胱癌细胞系的凋亡 情况。 4、 通过 western blot 检测经药物处理 24h 后膀胱癌细胞系凋亡相关蛋白的 表达，包括 caspase-3,8,9,以及 EGFR 及其下游通路关键蛋白的表达，包括 EGFR， AKT 和 ERK。 5、 将 T24 细胞接种于裸鼠皮下进行荷瘤，待瘤体长出后，于瘤内注射药物， 观察药物对瘤体的影