Copia因子是果蝇的一种反转录转座子.PPTVIP

Holliday intermediates （三）转座频率的调控 转座频率的调节对于转座子来说十分重要，一个转座子必须能维持一个最低转座频率才能存活，若频率太高会损伤宿主细胞。因此，每个转座子都有调控其转座频率的机制。 转座酶在转座过程中发挥着关键作用，一些转座子，比如Tn10，可以通过控制转座酶的合成调控转座发生的频率。 限制转座子转座频率的第二个途径是把转座过程局限在细胞周期的某一特定阶段。Tn10的两个末端反向重复序列，以及转座酶基因的启动子中各有一个GATC位点。我们知道，新合成的DNA分子的GATC位点是半甲基化的。RNA聚合酶和转座酶与半甲基化序列的结合能力要比与完全甲基化序列的结合能力强。所以，半甲基化的DNA不但能够激活Tn10的转座酶基因的启动子，还能够增强转座子末端的活性。结果，在DNA复制后的短暂期间，Tn10更容易发生转座。 分支迁移和Holliday中间体的拆分 分支迁移由结合在Holliday分支点上的RuvA和RuvB蛋白催化。RuvA以四聚体的形式识别并结合到Holliday分支点上。RuvB蛋白为催化分支迁移的解旋酶，但RuvB自身不能有效地与DNA结合，它需要与RuvA一起起作用。RuvC蛋白催化断裂反应，切开极性相同的两条单链，拆分Holliday 中间体。 5. 真核细胞的同源重组 发生在减数分裂过程中的同源重组有两方面的重要作用。一是确保同源染色体能够正确配对，而同源染色体的联会是生殖细胞形成时染色体数目减半的基础。另外，减数分裂重组也常常引起非姊妹染色单体之间的交换，结果是亲本DNA分子上的等位基因在下一代发生了重新排列。 减数分裂重组是由染色体DNA双链断裂启动的。在减数分裂的前期I同源染色体开始配对的时候，Spo11蛋白在染色体的多个位置上切断DNA。Spo11的切割位点在染色体上并非随机分布，而是多分布于染色体上核小体包装疏松的区域。Spo11蛋白由两个亚基组成，每个亚基上特异的酪氨酸分别进攻DNA分子两条单链上的磷酸二酯键，从而切断DNA，并且在断裂处形成磷酸－酪氨酸连接，所以Spo11与拓扑异构酶及位点特异性重组酶具有同样的性质。 在断裂处，MRX酶复合体利用其5’→3’的外切酶活性降解DNA，生成3’单链末端，其长度通常可达1 Kb或更长。MRX酶复合体由Mre11，Rad50和Xrs2三个亚基组成，并以三个亚基的首字母命名。MRX酶复合体还被认为能除去与DNA相连的Spo11。 在真核细胞中已经发现了两种与细菌RecA蛋白同源的蛋白质：Rad51和Dmc1。这两种蛋白质在减数分裂重组中发挥重要作用。Rad51在进行有丝分裂和减数分裂的细胞中广泛表达，而Dmc1则仅在细胞进入减数分裂时被表达。依赖Dmc1的重组倾向于发生在非姊妹染色单体之间。减数分裂重组可能是通过促进同源染色体的交联，而帮助待分离的同源染色体间的联会的。 除了鉴定出引起DNA双链断裂的Spo11、生成3’－单链末端的MRX以及介导链交换的蛋白质外，还发现了许多其他的蛋白质参与这一过程，例如，Rad52和Mus81。Rad52通过抵抗RPA的作用而启动Rad51蛋白丝的组装。因此，Rad52与大肠杆菌的RecBCD蛋白有相似的活性，RecBCD蛋白可以帮助RecA结合在原本被SSB所结合的单链DNA上，而Mus81蛋白可能是拆分Holliday中间体的酶。 二、位点特异性重组 位点特异性重组是发生在DNA上特定序列之间的重组，不依赖于DNA顺序的同源性，由能识别特异DNA序列的蛋白质介导，并不需要RecA蛋白和单链DNA。 λ噬菌体DNA侵入大肠杆菌细胞后，面临着裂解生长和溶原生长的选择。要进入溶原状态，游离的λ噬菌体DNA要插入到宿主的染色体DNA中去，这个过程称为整合（integration）。由溶原生长进入裂解生长，λDNA又必须从宿主染色体上切除下来，这个过程称为外切（excision）。这里，整合和外切均需要通过细菌DNA和λDNA特定位点之间的重组来实现，这些位点称为att位点（attachment site）。 如果受到诱导（induction），原噬菌体将从细菌基因组中切除（excision）。原噬菌体的切除需要两种噬菌体编码的蛋白质：整合酶（Int）和切除酶（Xis），另外还需要几种细菌蛋白，比如IHF和Fis。所有这些蛋白质都结合到attL和attR的P和P’臂上，而attL和attR中央的核心序列并排对齐排列促进原噬菌体的切除。 第二节 转 座 在生物的基因组中存在一类特殊的DNA序列，它们能够作为独立的单位从基因组的一个位置移动到另一个位置，这种能够改变自身位置的DNA序列被称为转座子（transposons）。