下调pp32恢复p300cbp组蛋白乙酰化转移酶活性改善学习记忆障碍-down - regulation of pp32 restores activity of p 300 cbp histone acetylated transferase to improve learning and memory disorders.docx

目 录 中文摘要1 ABSTRACT 3 前 言5 材料与方法 7 结 果 24 讨 论 45 小结 49 创新点 49 TOC \o 1-2 \h \z \u HYPERLINK \l _TOC_250006 Betaine attenuates Alzheimer-like pathological changes and memory deficits induced by homocysteine 53 HYPERLINK \l _TOC_250005 Introduction 54 HYPERLINK \l _TOC_250004 Materials and methods 57 HYPERLINK \l _TOC_250003 Results 60 HYPERLINK \l _TOC_250002 Conclusion 67 HYPERLINK \l _TOC_250001 Figure legends 68 HYPERLINK \l _TOC_250000 References 75 综述78 附录 1 博士期间参与科研项目95 附录 2 博士期间发表的文章 96 附录 3 博士期间所获奖励97 附录 4 博士期间所参加会议 97 致 谢98 华中科技大学博士学位论文 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 1 PAGE 1 中文摘要 【背景】 认知功能下降是包括阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）在内的神经退行性 疾病的一个重要特征。目前我们对引起认知损伤原因知道的还很有限，同时也缺乏有 效的治疗方法。长期记忆的形成需要有稳定的基因表达，这其中一部分主要受染色质 的表观遗传学的调控。研究发现神经系统中与学习和记忆相关的蛋白质，其基因水平 的调控主要跟组蛋白乙酰化修饰有关。组蛋白的乙酰化修饰后能降低与 DNA静电吸 引，促使转录因子与基因启动子的结合，最终引起记忆相关基因的表达。另外，通过 抑制组蛋白去乙酰化酶(HDAC)，提高组蛋白乙酰化水平而治疗认知损伤的药物也取 得 了令人鼓舞的实验结果。但是，引起组蛋白乙酰化 异常而导致记忆损伤的致病因子并 不清楚。 组蛋白乙酰化修饰主要由组蛋白乙酰化转移酶(HAT)及HDAC调节，而目前发现的 与学习记忆功能的 HAT为：p300/CBP HAT。已经证实p300/CBP HAT在海马依赖性的 空间记忆形成中起着关键性角色，并且HAT活性降低参与到神经退行性疾病中。因此， 找出能够特异恢复 p300/CBP HAT活性的因子可能是治疗学习记忆障碍相关疾病的最 佳靶点。pp32，细胞内抑制 p300/CBP HAT 复合物(INHAT)的一个主要因子。pp32为 INHAT发挥去抑制p300/CBP HAT必须因子，在AD患者脑中发现其表达增高。 【目的】 本研究旨在利用htau转基因鼠和学习 与记忆障碍的老龄鼠，探讨下调pp32对 p300/CBP HAT活性的影响和对学习记忆能力作用。 【方法】 构建特异针对pp32基因序列的RNA干扰慢病毒载体 Lenti-NC、Lenti-Sipp32。利用 水迷宫方法筛选出学习记忆障碍的 aged小鼠。采用脑立体定位技术，分别在学习记忆 障碍的老龄小鼠， htau转基因小鼠的海马注射2μl的Lenti-NC或Lenti-si pp32。30天 后 ， 利用水迷宫及电跳台检测其学习记忆能力变化。利用免疫组化、免疫印迹和免疫荧光 检测相关蛋白的变化；采用高尔基染色技术统计分析海 CA3区神经元树突的形态及树 突棘的密度；使用反转录聚合酶链式反应检测 pp32及相关记忆蛋白的 mRNA含量。 【结果】 Lenti-sipp32可以有效降低pp32的mRNA和蛋白水平，提高HAT和CREB活性，逆 转海马中突触相关蛋白及其mRNA水平，增加海马CA3区锥体神经元树突复杂性和树 突棘密度，恢复记忆障碍的老龄鼠和 htau转基因鼠的学习记忆能 力。下调pp32还可以 提高磷酸酯酶PP2A的活性，降低htau转基因鼠中的tau蛋白异常磷酸化水平。 【结论】 下调pp32通过提高HAT活性增加组蛋白乙酰化水平，提高CREB的活性促使学习 记忆相关基因表达和蛋白合成， 改善海马神经元树突复杂性和树突棘密度， 降低异常 磷酸化的tau蛋白，恢复其学习记忆能力。 【关键词】 pp32, 组蛋白，组蛋白乙酰化转移酶，突触，tau Abstract 【Background】