适于固体生物大样本的光学显微成像方法初步分析-preliminary analysis of optical microscopic imaging method suitable for large solid biological samples.docxVIP

华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 1 绪论 1.1 对固体生物大样本以微米分辨率成像的意义 生物体的解剖结构是公认的理解生物体生理功能和病理的基础。解剖学是一门 较古老的学科，由于生物体的结构非常复杂，所以解剖学的研究对象包含不同的层 次，从小到细胞大到器官、整体，以及器官之间的关系。 传统的大体解剖学是在整体观察和解剖过程中，用肉眼对组织水平的生物体器 官进行研究[1]，早在公元 6 世纪前后，我国的第一部医学经典著作《内经》中已有关 于解剖学方面的资料记载，其中已有心、肺、胃及脾等脏器的名称及其大小、位置 等内容。在公元 2 世纪，就有医学家通过解剖学知识来研究人体的生理功能。图谱 是我们对世界认知的记录，生物样本的结构图谱也称为解剖图谱，是表示生物样本 解剖结构的一种常用形式。文艺复兴时期（15 世纪），意大利画家 Da Vinci 对动物和 人体做了详细解剖，并绘制了最早的解剖图谱，被认为是时代巨著。大体解剖学中 组织器官的解剖图谱，不仅可以为医生提供组织器官的形态学信息，也可以在教学、 生理病理的研究中发挥作用。 而到微观层次的细胞解剖学，则是借助于特殊设备观察细胞及细胞内的结构。 微观层次解剖学的发展得益于 16 世纪后期发明的光学显微镜，通过对大量动植物解 剖结构的观察，人们逐渐意识到不同的生物都是由形形色色的细胞构成的，细胞是 生物体最小的功能单位。从 19 世纪细胞学说形成后，开辟了一个新的研究领域，在 显微水平研究生物体的结构与功能成为人们关注的焦点。因为有些病理的甄别需要 在成像中分辨出与临床相关的组织微结构，许多对昆虫、动物的胚胎、脑、局部器 官的研究中，也需要更为精细的、微米分辨率的数据，例如人体的毛细血管，是极 细微的血管，管径平均为 6～9μm[2]；还有小鼠鼠脑的神经元胞体尺寸一般为 5～30μm 等微细结构[3]，分辨这些微观结构是了解生物组织的结构和功能的基础。所以，得到 生物体的微观解剖图谱十分重要。 在生物医学的研究中，也需要对尺度在厘米或毫米的较大样本进行成像，以了 解大范围的、完整的生物解剖信息。例如小鼠鼠脑的平均长度为 2cm[4]，解剖图谱的 研究需要对小鼠全脑范围内的神经细胞成像，以此来了解神经网络的信息[5]。毛细血 管连于动、静脉之间，互相连接成网状，如果要了某些组织器官如脑、肺中的毛细 血管分布，也需要对这种组织的大样本成像，才能让人们对整个组织范围内的血管 网络有整体的认识和深入的研究[6]。 获取生物大样本的微观解剖图谱，成像分辨率需要达到微米水平，样本往往为 离体的组织或细胞，这对生物样本制作也提出了要求。如果生物样本呈液态或处在 液体环境中，例如在培养液中的组织或细胞，样本中的组织或细胞在成像时较易发 生位移和形态变化，无法准确地获得解剖图谱，也无法实现通过对微小样本的连续 成像而获得大样本的图谱的目的。因此在生物医学研究中，为了在较长时间内维持 生物组织结构的形态位置，便于观察，一般是将生物组织进行固定、包埋等步骤后， 制作成为了固体生物样本[7]。根据以上所述，对固体生物大样本以微米分辨率成像， 可以帮助我们了解精细、整体的生物体解剖结构信息。 1.2 现有获取生物样本解剖图谱的成像方法及特点 在过去的二十年里，生物医学成像方法取得了长足的进步，为科学家们提供了 丰富的生物组织结构信息，也为医生们提供了必不可少的宏观解剖信息。较为常用 的成像方法如下： X 射线计算机断层扫描成像（X-ray Computed Tomography, X-CT）, 是以测定 X 射线在生物体内的衰减系数为基础，采用数学方法，经计算机处理，求解出衰减系 数值在生物体某剖面上的二维分布矩阵，转变为图像画面上的灰度分布，从而实现 重新建立断面图像的现代医学成像技术。例如用 X-CT 方法构建的人牙齿三维图谱[8] 等。 磁共振成像（Magnetic Resonance Imaging，MRI）是一种生物磁自旋成像技术， 它是利用原子核自旋运动的特点，在外加磁场内，经射频脉冲激后产生信号，用探 测器检测并输入计算机，经过计算机处理转换后在屏幕上显示图像。MRI 可以观察 颅脑，及其脊髓、关节骨骼、软组织等的解剖结构，也可作冠状、矢状及横断面像， 得到三维解剖图谱[9]。 超声成像可以利用超声波在不同组织中产生的反射和散射回波形成的图像或信 号，进行解剖学范畴的检测，以了解器官的组织形态学方面的状况和变化，来鉴别 组织结构和诊断疾病。使用超声成像方法也可以获得人体图谱[10]。 光学成像也是一种常用的方法，例如使用数码相机通过光学成像的方法得到的 “中国数字人男一号”图谱[11]，以及大鼠解剖图谱[12]。 但是，上述的几种成像