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2型糖尿病患者血清miR126表达临床意义 　　【摘要】 目的：探讨2型糖尿病患者外周血血清中miR-126的表达水平及其临床意义。方法：采用荧光定量PCR方法检测77例糖代谢异常患者血清miR-126的表达（其中糖调节受损组26例, 初发2型糖尿病组23例，2型糖尿病伴有血管病变患者28例，和30例健康对照组）。结果：miR-126在健康对照组与糖调节受损组血清中的表达无明显差异（P0.05）；初发糖尿病组与健康对照组及糖调节受损组之间均有差异（P0.05）。结论：2型糖尿病及合并有血管病变患者外周血血清中miR-126水平低表达。 　　【关键词】糖尿病；2型；miR-126；血清 　　2型糖尿病的发病机制复杂至今尚未完全清楚，主要与胰岛素作用的缺陷有关。近年研究发现微小核糖核酸（microRNA，miRNA）与胰岛素的生成、胰岛素分泌、胰岛素作用及胰岛的发育密切相关，并发现了很多胰岛特异性的miRNAs【1，2】，而且miRNA存在于人类外周血中，在血清和血浆中均持续表达而且水平稳定【3】，具有可重复性；这一特性使得miRNAs有望成为多种疾病中新的非创伤性生物学标记物。本文采用逆转录荧光定量PCR方法检测了2型糖尿病患者外周血血清中miR-126的表达水平，探讨了其在糖尿病发病中的意义。 　　1 资料与方法 　　1．1 一般资料：选取2010年6月至2010年12月就诊于杭州市第一人民医院的77例糖代谢异常患者及30例健康对照者，其中糖尿病伴有血管病变患者28例（包括脑梗死3例，视网膜病变12例，肾病13例），男15例，女13例，年龄53～75岁（平均58.43±5.72岁）；初发糖尿病组23例，男11例，女12例，年龄48～68岁（平均55.74±6.51岁）；糖调节受损组26例（包括空腹血糖受损，OGTT结果FPG6.1~7.0mmol/L，且2 h PG7.8mmol/L；葡萄糖耐量减退，OGTT结果为2 h PG 7.8~11.0 mmol/L），男13例，女13例，年龄49～61岁（平均56.12±3.32岁）；健康对照组30例，（OGTT结果为FPG6.1mmol/L且2 h PG7.8mmol/L）男15例，女15例，年龄51～62岁（平均56.23±3.65岁）。 　　1．2血糖测定采用葡萄糖磷酸脱氢酶法在全自动生化分析仪上进行检测，口服葡萄糖耐量试验(OGTT)指受试者于空腹及口服75g 无水葡萄糖后2 小时分别抽取静脉血，测空腹血糖和2 小时血糖。 　　1．3血清总RNA提取 分离1ml血清储存于-80℃冰箱，待标本收集完成后统一采用RNeasy Mini Kit总RNA提取试剂盒（QIAGEN，74104）提取血清中游离总RNA。 　　1．4miR-126表达的检测miR-126定量检测采用茎环逆转录荧光定量PCR方法，以U6为内参，引物与探针购置Appliedbiosystems公司。逆转录反应体系如下：10×逆转录缓冲液1.5ul，100mM dNTP 0.15ul，逆转录酶1.0ul，RNase抑制剂0.19ul，逆转录引物3.0ul，总RNA5.0ul，水补足15ul后，置30℃孵育30分钟，42℃孵育45分钟，85℃孵育5分钟。荧光PCR体系如下：2×PCR缓冲液10ul，20×miR-126特异引物和荧光探针1ul，逆转录产物1ul，水补足至20ul，置ABI7500荧光PCR仪上按照95℃ 5分钟，95℃ 15秒，60℃ 45秒反应40个循环，采集数据分析结果。 　　1．5统计学分析：使用SPSS16.0统计软件进行统计分析。计量资料均以(x±s方式表示，组间计量资料比较用方差分析，以p0.05为差异，有统计学意义。 　　2结果 　　2．1 资料分析结果：四组研究对象的性别分布，年龄方面无统计学差异（p0.05）；而空腹血糖和餐后2小时血糖在健康对照组、糖调节受损组、初发糖尿病组和糖尿病伴有血管病变组呈现梯度增高趋势，各组之间有统计学差异（P0.01）见表1。 　　 　　2．2血清总RNA提取1ml血清提取的总RNA浓度在四组间无统计学差异（P0.05）； 对照组总RNA浓度为（35.43±3.21）ng/ul，糖调节受损组总RNA浓度为（34.57±3.09）ng/ul，初发糖尿病组总RNA浓度为（35.87±4.26）ng/ul，糖尿病伴有血管病变组总RNA浓度为（34.76±3.28）ng/ul。 　　2．3四组血清miR-126表达分析:对照组血清miR-126相对表达水平为（0.154±0.012）ng/ul，糖调节受损组为（0.158±0.014）ng/ul，初发糖尿病组为（0.092±0.024）ng/ul，糖尿病伴有血管病变组为（0.082