NINJ2基因多态性与云南汉族脑卒中患者相关性研究.docVIP

NINJ2基因多态性与云南汉族脑卒中患者相关性研究 　　摘要：目的 探讨云南地区汉族人群NINJ2基因多态性与脑梗死及脑出血的相关性。方法 选择云南地区汉族脑卒中患者97例，其中脑梗死86例，脑出血11例；健康对照者130例，采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测NINJ2基因两个SNP位点（rr的基因型，比较各组间的基因型及等位基因分布频率是否存在差异。结果 脑梗死与脑出血两组比较，r位基因（A，G）频率存在差异（P0.05），rsl2425791基因型及等位基因频率均无差异；脑梗死与对照组、脑出血与对照组、脑卒中与对照组两两比较，基因型及等位基因频率无差异。结论 NINJ2基因的r点可能是区分脑卒中亚型的敏感位点。NINJ2基因两个SNP位点（rr与汉族人群的脑卒中无相关性。 　　关键词：脑卒中；基因多态性；单核苷酸 　　目前对脑卒中的研究已经达到基因水平，位于12号染色体旁侧的NINJ2和WNK1基因间两个单核苷酸多态位点（single nucleotide polymorphisms， SNP）rr白种人脑梗死有关联，尤其与大动脉粥样硬化型脑梗死显著关联[1]。我们选取云南地区汉族人群进行相关研究，旨在分析该基因的两个位点与脑梗死、脑出血的相关性。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 2010年6月～2013年6月在云南省第一人民医院住院的脑卒中患者，对照组为同期体检的同一民族健康人群。其中脑梗死患者86例，男47例，女39例，年龄40～89岁，平均60.3岁；脑出血患者11例，男6例，年龄46～78岁，平均62.5岁；健康对照者130例，男77例，女53例，年龄39～80岁，平均60.6岁。排除患有冠心病、周围血管病、血液系统疾病、肝肾功能异常、甲状腺疾病、严重感染、恶性肿瘤、糖尿病、慢性胃肠道疾病、妊娠者。研究均取得患者及健康对照者知情同意。 　　1.2方法 取研究对象清晨空腹血5ml入抗凝管，离心后放入-20℃冰箱保持以供提取DNA用。聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment lengthpolymorphism，PCR-RFLP）分析检测SNPs基因型：利用TiangenTM血液基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，引物合成均由上海捷瑞生物工程有限公司合成：①r态性检测：上游引物5-ACTTTCTGGAAAACCTTATTTC -3，下游引物5-CTCTATTCAGCCAGATGTATC-3。 [A/G]多态性反向延伸产物为CT，长度为36，延伸引物为TTTTTTTTTTTTTTATAGTTAATATTTTGCTTCTGG 。PCR反应体系15ul，扩增条件：95℃3 min预变性，94℃变性15S，60℃退火15S，72℃延伸30S，11个循环后94℃变性15S，54℃退火15S，72℃延伸30S，24个循环后72℃温浴3min。PCR扩增后取3μlPCR产物用ExoI（Fermentas公司）和FastAP（Fermentas公司）纯化，主要是用ExoI去除反应产物中的剩余引物，用FastAP去除反应中剩余的DNTP（Fermentas公司）。纯化好后进行延伸反应，预先混好延伸引物，取PCR产物2μl，Snapshot Mix 试剂1μl（ABI公司），延伸引物混合2μl，补水至6μl，96 ℃ 1min预变性，96℃变性10S，52℃退火5S，60℃延伸30S，30个循环后取PCR延伸产物1μl，加10μl上样loading，95°C变性3min，立即冰水浴，上测序仪检测分析基因型。PCR仪型号为：东胜o龙（EDC-810），测序仪型号为ABI 3730XL；②r态性检测上游引物5-TGTCTGCATTCATAGTGAAGT-3， 下游引物5- GAAGGCATCAGGGCTGGAGAA -3。[A/G]多态性正向延伸产物为AG，长度为29，延伸引物为TTTTTTTTCTCTCTGAAGGATCCAGCCCC。其余测量过程同r 　　1.3统计方法 应用SPSS 16.0统计学软件进行分析，χ2检验比较各组基因型频率和等位基因频率，位点基因型Hardy-Weinberg遗传平衡检验采用χ2检验。P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1脑梗死患者与脑出血患者比较，NINJ2基因r等位基因（A/G）频率有显著差异，rs