SATB1在人不同前列腺癌细胞系中表达实验研究.docVIP

SATB1在人不同前列腺癌细胞系中表达实验研究 　　[摘要]目的：探讨SATB1与前列腺癌增殖及侵袭发生的关系。方法：体外培养前列腺癌细胞系（LNCaP、PC3、DU145），MMT法检测其增殖能力；Tanswell细胞侵袭实验检测其侵袭能力；RT-PCR检测其SATB1 mRNA的表达情况；Western blot检测其SATB1蛋白质的表达。结果：前列腺癌细胞PC3和DU145的增值能力及侵袭能力比LNCaP强（P0.01），PC3和DU145细胞中SATB1 mRNA及蛋白质表达水平均显著高于LNCaP细胞（P0.01）。结论：SATB1在前列腺癌表达水平可能与前列腺癌的增殖和侵袭正相关。 　　[关键词]SATB1；前列腺癌；LNCaP；PC3；DU145 　　[中图分类号]R737.25 [文献标志码]A 　　随着我国人口的老龄化、饮食结构和生活方式的改变，以及诊断水平的提高，前列腺癌在国内发病率与相关死亡人数也在逐年上升，在我国男性恶性肿瘤发病率排名中居第六位：死亡率在所有男性恶性肿瘤中排第九位。前列腺癌对人类健康的威胁变得越来越严重，已成为影响我国男性，尤其是50岁以上男性健康的一个重要因素。SATB1（special AT rich sequencebinding protein 1）是一种组织特异性表达的核基质结合蛋白（matrix attachment regions binding protein），在胸腺细胞和前B细胞之中显著表达，其次是造血干细胞和神经干细胞，在其他细胞中很少表达。研究发现SATB1与乳腺癌、肝癌、胃癌、食道癌、结直肠癌、黑索瘤、膀胱癌、肾癌等肿瘤的发生及转移有关。我们前期的研究发现SATB1在前列腺癌中高表达，且其与病理分级、临床分期密切相关。本研究通过比较不同前列腺癌细胞系（LNCaP、PC3和DU145）之间的增殖与侵袭能力及其与SATB1基因和蛋白质表达情况，探讨SATB1在前列腺癌增殖及侵袭中的作用，为前列腺癌的诊断、治疗寻找一个可能的新靶点。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 细胞株 人前列腺癌细胞株LNCaP、PC3和DU145购自中国医学科学院基础医学研究所细胞研究中心。 　　1.1.2 主要试剂 RPMI 1640培养基购自美国Gibco公司；胎牛血清购自美国Hyclon公司：胰蛋白酶、DMSO（二甲基亚砜）和Hochest33258购自美国Sigma公司；MTT（四甲基偶氮唑盐）购自北京中杉公司；3422 Transwell购自美国Coming公司；Trizol试剂购自美国Invitrogen公司；RT-PCR试剂盒、Wide RangeDNA Marker、TaqDNA聚合酶均购自日本Takara公司；羊多抗SATB1购自美国Santa Cruz公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养 LNCaP、PC3、DU145细胞培养于含10%FBS的RPMI 1640培养基（青链霉索各100U/mL）中，于37℃、5%C02饱和湿度下培养箱内常规培养，每48h换液一次，细胞密度达80%时，按1：2或1：3进行传代。 　　1.2.2 实验方法 1.2.2.1 噻唑蓝（MTI）比色法测定检测LNCaP、PC3、DU145细胞增殖能力 将生长状态良好的上述3种细胞，制备单细胞悬液，按每孔103个细胞接种于96孔细胞培养板中，每组设4个复孔，分别将3种细胞培养至24h、48h、72h；每孔中加入预先配制好的MTT试剂20μL，37℃继续孵育4h，弃孔内培养液，然后每孔加二甲亚砜（DMSO）150μL混合均匀在酶联免疫检测仪上570nm波长处检测各孔吸光度值（A），记录结果，取均值，以时间为横轴，光吸收值（A）为纵轴绘制细胞生长曲线。 　　1.2.2.2 Tanswell细胞侵袭试验检测LNCaP、PC3、DU145细胞的侵袭能力 将Corning3422 TransweH培养板提前一天用Fi-bronectin包被过夜：取上述3组的细胞，胰酶消化后用FBS 5%的RPMI 1640培养基悬浮；以2×105/mL的细胞密度接种至上面的小室中，每孔100μL，下室加入600μL含FBS 10%的RPMI1640培养基中，每种细胞4个复室；培养24h后用Hochest33258避光染色，以穿过Transwell小室的细胞数量，作为评价侵袭能力的指标。荧光显微镜下观察计数，每张片取4个视野，记录数值。 　　1.2.2.3 RT-PCR检测LNCaP、PC3、DU145细胞SATB1 mR-NA的表达 Tfizd法提取细胞的总RNA，紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度，1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性；取RNA逆转录合成cDNA；