Co2对聚酰胺胺树状大分子和牛血清蛋白相互作用影响.doc

Co2对聚酰胺胺树状大分子和牛血清蛋白相互作用影响 　　[摘要] 目的 研究Co2+对具有不同末端基团的聚酰胺胺（PAMAM）树状大分子与牛血清白蛋白（BSA）的相互作用，并探讨其作用机制。 方法 采用紫外光谱法研究以乙二胺为核的PAMAM树状大分子与Co2+的相互作用。应用荧光光谱法研究生理条件下（pH=7.4）PAMAM、BSA、Co2+三者之间的相互作用。 结果 Co2+可与G4.0 PAMAM配位，而与G3.5 PAMAM几乎无作用；两类PAMAM及Co2+均导致BSA的内源性荧光猝灭，但Co2+对BSA的猝灭几乎可以忽略；Co2+导致了整代PAMAM与BSA的猝灭常数减小，而对半代PAMAM与BSA的相互作用影响不大。 结论 Co2+的存在可在一定程度上影响具有末端氨基的PAMAM树状大分子与BSA间的相互作用，对研究该类药物载体与BSA的结合有指导作用。 　　[关键词] PAMAM树状大分子；牛血清白蛋白；Co2+；荧光猝灭 　　[中图分类号] O631.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）07（c）-0099-04 　　聚酰胺胺（PAMAM）树状大分子是由Tomalia等[1]首次合成的一类新型的聚合物，具有较大的内部空腔和大量的端基官能团，可与多种有机小分子或聚合物结合，并且具有细胞毒性低等许多独特的生物性状。正是由于这些优势使其非常适宜作为药物和基因的转运载体[2-4]。众所周知，多数药物进入人体后，必须通过血浆的储存和运输才能到达靶部位，进而发生药理作用。血清白蛋白是血液中一类重要的蛋白质，对许多内源性和外源性的药物都具有较高的亲和力[5]。血清白蛋白还可与许多金属离子结合，另有报道显示，具有不同末端基团的PAMAM也可与多种金属离子（Cu、Zn、Co、Ni、Pb、Cd）发生配位作用[6-7]。因此，研究PAMAM，金属离子与白蛋白的相互作用，对阐明该药物载体在体内的转运、分布和代谢等具有重要意义。 　　本实验利用紫外-可见光谱法研究Co2+与PAMAM树状大分子的配位作用；利用荧光光谱法研究PAMAM树状大分子在生理条件下与牛血清白蛋白、Co2+三者的作用，并探讨相互作用机制，以及对蛋白构象的影响。 　　1仪器与试药 　　1.1 试剂 　　3.5代（G3.5，具有末端酯基）和4.0代（G4.0，具有末端氨基）以乙二胺为核的PAMAM 树枝状大分子，实验室自制；牛血清白蛋白BSA（组分Ⅴ，生化试剂，南京大冶生物科技有限公司）；CoCl2（分析纯，上海振兴试剂厂）；三羟甲基氨基甲烷；实验用水为二次蒸馏水，其他试剂均为分析纯。 　　1.2 仪器 　　RF5301型荧光分光光度计（日本岛津公司）；UV2100型紫外分光光度计（日本岛津公司）；pHS-25型酸度计（上海伟业仪器厂）；BS 124S型电子天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]。 　　2 方法与结果 　　2.1 紫外光谱法研究G4.0 PAMAM和G3.5 PAMAM与Co2+配位作用 　　配制一定浓度的G3.5 PAMAM和G4.0 PAMAM树状大分子与Co2+的混合体系，在波长为200～800 nm的范围内扫描紫外光谱，狭缝宽度为2.0 nm[8]。 　　2.2 各类PAMAM树状大分子对牛血清白蛋白荧光的猝灭作用 　　将BSA溶解于pH为7.4的Tris-HCl缓冲盐溶液（缓冲液含NaCl的浓度为100 mmol/L）中，配制成终浓度为5 μmol/L的溶液。室温下测定上述浓度溶液的荧光光谱。激发波长选择295 nm，发射波长为300～460 nm[9]。然后向BSA溶液中分别加入不同浓度的各类树状大分子溶液，在同样条件下测定其荧光光谱，记录荧光强度。 　　2.3 Co2+对牛血清白蛋白荧光的猝灭作用 　　按照“2.1”项下方法，向BSA溶液中分别加入不同浓度的Co2+，测定其荧光光谱，记录荧光强度。 　　2.4 Co2+对PAMAM树状大分子和BSA相互作用的影响 　　将BSA溶解于pH为7.4的Tris-HCl缓冲盐溶液（NaCl浓度100 mmol/L）中，配制成浓度为5 μmol/L的溶液。然后向其中分别加入一定量的CoCl2溶液，制成BSA- Co2+二元猝灭体系[10-11]，按照“2.2”项下方法测定其荧光光谱。随后向该混合溶液中加入不同浓度的G4.0 PAMAM或G3.5PAMAM树状大分子溶液，在同样的条件下测定荧光光谱。 　　2.5 紫外光谱法研究G4.0 PAMAM和G3.5 PAMAM与Co2+配位作用结果 　　图1是PAMAM树状大分子水溶液在pH值为7.40，25℃下的紫外可见光吸收光谱图。从图中可以看出，该溶液在紫外区有较大吸收，而在可见