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WT1基因在急性白血病患者中表达及临床意义 　　【摘要】 目的：探讨急性白血病患者中WT1基因的表达及临床意义。方法：选取2013年1月-2014年1月笔者所在医院收治的急性白血病患者100例，检测其WT1基因，并完成短期随访，就该基因与病程的相关性与在各型白血病患者中表达差异展开分析。结果：WT1在AML、ALL患者中表达均居较高水平，AML阳性表达率为76.9%（50/65），ALL阳性率表达为88.6%（31/35），差异无统计学意义（P0.05）。M1型AML WT1表达居最高水平，M3型相对较低，WT1表达与预后有密切关联。结论：本次研究AL患者中WT1的高表达再次证实，其与疾病发生、发展关联密切，可作为对白血病治疗效果评估、复发预测、预后估计的有效指标。 　　【关键词】 WT1基因； 急性白血病； 表达 　　中图分类号 R733.7 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2014）20-0081-03 　　WT1基因于人类染色体1lp13定位，编码产物为转录因子，在运用分子遗传学原理研究遗传性肾胚胎肿瘤时发现，对肿瘤病程发展有直接影响[1]。其表达以在胚胎发生过程中为主，在泌尿生殖系统发育中作用明显，其在成人正常的造血细胞和脾脏、肾脏、睾丸、子宫内膜、卵巢中表达较少，但在白血病细胞中，表达居较高水平，直接参与白血病细胞的分化、增殖，影响疾病进展及预后，故与急性白血病（AL）关联密切[1]。将WT1的cDNA在NIH3T3细胞中微注射，对细胞从G0或G1中期转入S期有阻止作用，故将WT1基因定位为肿瘤抑制因子[2]。AL属恶性造血干细胞克隆性疾病，骨髓中异常的幼稚细胞（白血病细胞）及原始细胞在发病时大量增殖，并向肝、淋巴结、脾等各种脏器广泛浸润，对正常造血功能产生抑制。以浸润、贫血、感染、出血等征象为主要表现[3]。在人类大部分AL细胞中，WT1基因表现为异常高表达，表明AL病程与WT1基因有密切相关性。本研究选取相关病例，检测WT1基因，就其在各型白血病患者中的表达差异及与病程的关系展开探讨，现将结果报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取2013年1月-2014年1月笔者所在医院收治的急性白血病患者100例，男58例，女42例，年龄5～75岁，平均（45.2±2.1）岁。所有患者均经免疫分型、血象检查、染色体检查、组织化学染色、骨髓象检查确诊，部分行融合基因检测。依据《血液病诊断及疗效标准》分型，其中急性髓细胞性白血病（AML）65例，其中M1型3例，M2型17例，M3型28例，M4型10例，M5型7例；急性淋巴细胞白血病（ALL）35例。患者均自愿签署本次实验知情同意书，并排除机体其他系统严重疾患者。 　　1.2 方法 　　（1）试剂：准备淋巴细胞分离液、荧光定量PCR反转录反应体系。（2）单个核细胞RNA提取：取外周血5 ml或骨髓血3 ml，给予肝素应用行抗凝操作，取0.9%气化钠溶液5 ml稀释，严格无菌操作，铺于淋巴细胞5 ml分离液上，设置为2000×g，保持15 min离心，将白膜层轻柔吸取，于另一离心管置入，用等渗PBS行2次洗涤，1500×g，保持10 min离心，将上清液弃除，于-80℃保存沉淀物，以对RNA提取。总RNA提取方法参照说明书进行，RNA量及估计纯度用紫外线分光光度仪测定[4-5]。（3）PCR扩增WT1基因：采用由中国科学院合成的WT1基因引物，扩增产物为481 bp，内参基因用β-actin，过增产物为240 bp。取反转录反应体系应用，取1 μg PNA在5×缓冲液5 μl中加入，dNTP（10 mmol/L）4种混合液共0.5 μl，加双蒸水使总体积达25 μl。完成PCR的扩增后，将PCR产物取5.0 μl，加入1.3%琼脂糖凝胶中实施电泳操作，后结果用GDS 8000凝胶成像分析仪分析。 　　1.3 观察指标 　　随访1年，依据患者WT1基因定量、骨髓、外周血等指标，对病情状态进行评估[6-7]。 　　1.4 统计学处理 　　所得数据采用SPSS 13.0统计学软件进行处理，计数资料采用字2检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　基因表达情况具体表现在：（1）WT1基因在AL患者中的表达：WT1在AML、ALL患者中表达均居较高水平，AML阳性表达率为76.9%（50/65），其中M1阳性表达2例，M2型8例，M3型11例，M4型16例，M5型13例；ALL阳性率表达为88.6%（31/35），在阳性表达方面，AML与ALL比较差异无统计学意义（P0.05）。（2）WT1基因表达水平在AML亚型间差异：M1型AML表达居最高水平，M3型相对较低，对比各亚型间WT1表达，差异有统计学意义（P1