Cjun 在慢性支气管炎大鼠肺中表达及与气道重塑间关系初探.docVIP

Cjun 在慢性支气管炎大鼠肺中表达及与气道重塑间关系初探 　　【摘要】 目的 观察香烟暴露诱导慢性支气管炎模型大鼠肺组织中c??jun表达及与小气道重塑间关系。方法 40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、吸烟30 d组(Ⅰ组)、吸烟60 d组(Ⅱ组)及吸烟90 d组(Ⅲ组)；被动吸烟诱导大鼠慢性支气管炎模型， 镜下比较各组大鼠细支气管平滑肌及胶原层变化，免疫组织化学法检测肺组织中C??jun 表达蛋白JUN 的水平。 结果 吸烟大鼠30 d后气道发生明显慢性炎症变化，与对照组比较，Ⅱ组、Ⅲ组大鼠细支气管管壁厚度与气管外径比值(MT%)及管壁面积与气管总面积比值(MA%)显著增高(P0??05)；Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组大鼠肺组织JUN 表达显著增强，且呈逐渐增加趋势。 结论 被动吸烟导致大鼠慢性支气管慢性炎症及气道结构重建，c??jun 表达的增高可能在小气道重塑过程中起重要作用。 　　【关键词】 吸烟；慢性支气管炎；c??jun；气道重构 　　1 材料与方法 　　1??1 主要试剂及仪器 C??Jun 兔多克隆抗体、鼠抗兔二抗为Santa Cruz 产品；SABC免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术公司。Masson 胶原染色试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。HPLAS??1000高清晰度彩色病理报告分析仪及计算机图象处理系统及相应软件(德国Opten)。 　　1??2 动物模型的建立、分组及标本处理 实验动物为清洁级SD大鼠，2个月龄雄性大鼠40只，体重(200±20)g，购自中山大学中山医学院实验动物中心。大鼠随机分为正常对照组、吸烟30 d组(Ⅰ组)、吸烟 60 d组(Ⅱ组)、吸烟 90 d组(Ⅲ组)，每组均为10只。参照许三林等的方法制作被动吸烟装置［1］。实验香烟为武汉市售红双喜牌香烟(武汉卷烟厂制)，尼古丁含量为每支1 mg，焦油含量每支18 mg。 吸烟组放人自制的吸烟箱中，每次点燃2支香烟放入，燃烧10 min，休息5 min后再放入2支香烟，每天吸烟40支，每周吸烟6 d。分别在吸烟30、60、90 d后处死各组大鼠。分离肺组织, 左下叶置于4%甲醛固定液中保存，常规石蜡包埋、切片 4 μm，组织学检查(HE与Masson染色)及免疫组化备用。 　　1??3 指标观察 　　1??3??1 肺细小支气管病理及形态学测定 石蜡切片做Masson染色，测定直径在750～1100微米 之间，长径与短径之比不小于0??7的膜性细支气管的外径、管壁厚度(中膜肌层)、管壁面积和气管总面积，然后计算管壁厚度与气管外径比值(MT％)，管壁面积与气管总面积比值(MA％)，并计算出均数，作为大鼠的肺细小支气管气道重构定量指标观察。 　　1??3??2 C??jun 基因表达蛋白JUN免疫组化染色 采用链霉亲和素?补?氧化氢物酶法(SABC法)，实验步骤严格按照试剂盒说明书进行操作；用0??01 mol／L 磷酸盐缓冲液和正常羊血清取代一抗作为空白对照与替代对照。光镜下每张切片随机选5个含有完整支气管横断面的区域，计算阳性细胞个数并作分析。 　　1??4 统计学处理 全部数据均以x±s表示。数据采用SPSS 11??0软件进行方差分析，以LSD法进行不同组别之间的两两比较。 　　2 结果 　　2??1 HE染色观察 HE染色镜下观察：对照组气管、肺泡组织结构正常；Ⅰ、Ⅱ组大鼠肺组织中可见明显慢性细支气管炎，炎症侵犯细支气管全层，炎症细胞侵及全层(包括固有膜、中膜肌层和外膜)，炎症细胞包括单核巨噬细胞、淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等多种细胞，以单核巨噬细胞、淋巴细胞为主，黏膜下腺体增生明显(图2)；而Ⅲ组大鼠与Ⅰ、Ⅱ组比较，除细支气管全层炎症变化外，可见到小气道全层炎症向周围肺组织扩散，细支气管中膜肌层平滑肌显著增生、肥厚，排列紊乱，并有广泛的肺气肿形成。 　　2??2 各组大鼠细支气管平滑肌层及胶原厚度的比较 Masson染色：对照组及Ⅰ组大鼠细支气管平滑肌层菲薄，Ⅱ、Ⅲ组细支气管中膜肌较正常组显著增生肥厚(P0??05)。 　　2??3 各组大鼠肺组织JUN表达的比较 正常对照组大鼠肺内几乎无JUN 蛋白阳性染色，Ⅰ组大鼠气道JUN 蛋白表达较对照组明显增加(P0??05)，胞核棕黄色阳性细胞主要于气道上皮细胞、炎性细胞和平滑肌细胞，Ⅱ、Ⅲ组大鼠JUN 蛋白阳性细胞多分布于气道平滑肌层及炎性细胞中(P0??05)。 　　3 讨论 　　慢性支气管炎小气道慢性炎症持续存在，迁延进展，气道炎症导致的组织损伤修复反应可出现气道重构，平滑肌细胞增生及结缔组织沉着，从而使末梢气道腔内呈物理性狭窄，导致肺功能进行性减退。c??jun是禽肉瘤逆转录病毒基因ASV17 的细胞内同源基因，由 Bohmann 于1987年发现［2］。