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第七章 酶促反应动力学 概述  研究酶促反应的速率以及影响此速率的各 种因素的科学  研究酶结构和功能的关系以及酶的作用机 制，需要动力学提供试验数据  发挥酶促反应的高效率，寻找最为有利的 反应条件  酶在代谢中的作用和某些药物的作用机制  具有理论研究的意义和实践价值 2011-4-1 海洋生命学院 2 一、酶的活力测定 ㈠酶活力(enzyme activity)测定 1、酶活力与酶反应速度 [P] 产 V0 VX  酶活力指酶催化一定化学反 物 浓 应的能力，以测出的酶促反度 反应初速度Vo 应速度表示酶的活力  即测定单位时间、单位体积 底物减少量或产物增加量来 0 X 时 间 T 产物浓度变化曲线 表示  初速度，测定产物增加量 ㈠ 酶活力（enzyme activity) 测定 2、酶的活力单位（U activity unit)  酶活力单位 （U）的定义：在一定条件下，一定时间内将一 定量的底物转化为产物的酶量。  国际单位：最适条件下，在1分钟内催化1微摩尔底物转化为 产物所需的酶量定为1个单位，即1IU=1um/min  Kcat单位：最适条件每秒钟催化1摩尔底物转化为产物所需的 酶量，定为1个Kcat单位. Kcat单位与IU单位之间的换算关系如下： 6 1Kcat=60 ×10 IU 1IU=1/60uKcat=16.7nKcat BUT………  限制性核酸内切酶3种定义  用粘度法测活性：30℃，1分钟，使底物DNA溶液 的比粘度下降25%的酶量为1个酶单位。  转化率法：5分钟使1ug供体DNA残留37% 的转化活 性所需的酶量为1个酶单位。  凝胶电泳法测活：37℃，1小时，使1ugλDNA完全 水解的酶量为1个酶单位。 淀粉酶两种定义 A ：1 g可溶性starch，在1h 内液化所需的enzyme量。 B ：l ml 2% 可溶性starch ，在1h 内液化所需的 enzyme量 1g 酶制剂溶于1000ml H O，取0.5ml与2%的starch 20ml反 2 应，pH6.0，10分钟完全液化，求酶活力。 A ：20 ×2% ×1/0.5 ×1000×60/ 10=4800u/克enzyme制剂 B：20/0.5 ×1000×60/ 10=240000u/克enzyme制剂 ㈠ 酶活力（enzyme activity) 测定 3、酶的比活力（specific activity)  每毫克蛋白质或每毫升蛋白质所含酶的活力 单位数，用单位/毫克蛋白或单位/毫升来表 示，n U/mg 或n U/ml  代表酶的纯度，比活力越大纯度越高  可用来比较每单位质量蛋白质的催化能力， 酶产品质量评价中常使用的指标 ㈠ 酶活力（enzyme activity) 测定 4、酶活力的测定方法  测定酶活力就是测定产物的增加 或底物的减少，根据产物或底物 的物理或化学性质来决定具体酶 催反应的测定方法 ⑴ 分光光度法：利用底物和产物在 紫外或可见光部分的光吸收的不 同，选择一适当的波长，测定反 应中反应进行的情况，酶活力测 定中最重要