三种检测方法在金黄色葡萄球菌中应用价值研究.docVIP

三种检测方法在金黄色葡萄球菌中的应用价值研究 　　摘要：目的：比较三种检测方法在金黄色葡萄球菌中的应用价值。方法：通过完成三种检测方法的选择性鉴定实验、敏感性实验及食品中检测应用来比较三种检测方法的各项检测指标。结果：金黄色葡萄球菌在3种检测方法的培养基中均有生长且菌落特征明显，三种金黄色葡萄球菌检测方法中Baird- Parker+RPF法敏感性最高，PetrifilmTM测试法次之，Baird- Parker法最低。三种金黄色葡萄球菌检测方法在检测生鲜乳中，Baird- Parker+RPF法检出率最高，PetrifilmTM测试法次之，Baird-Parker法最低，三组之间率的比较差异具有统计学意义；两两比较结果显示，Baird-Parker+RPF法检出率高于Baird-Parker法，差异具有统计学意义（P0.0167）。三种金黄色葡萄球菌检测方法中Baird-Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法的各项检测指标均优于Baird- Parker法。结论：Baird-Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法的敏感性、在食品检测中的检出率、操作简便性、检测时间均优于Baird- Parker法，更适合作为基层检测部门的现场检测方法。 　　关键词：Baird-Parker法；Baird-Parker+RPF法；PetrifilmTM法；金黄色葡萄球菌；应用价值 　　随着我国经济的发展和报道的透明化，越来越多的有关食品安全的问题被曝光，国内的食品安全问题受到社会广泛的关注。而食品安全问题主要集中表现为食物中毒，一般引发食物中毒的原因主要是微生物性食物中毒，在我国的细菌性食物中毒事件中，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒约占四分之一，故如何快速、简便、有效地检测出食品中的金黄色葡萄球菌，具有重要的现实意义[1]。本文主要对Baird-Parker 平板涂布法和PetrifilmTM 测试纸片法以及Baird-Parker+RPF平板倾注法检测金葡菌进行比较，旨在探求一种适应微生物实验室要求的食品快速检测方法，有效改善食品安全问题。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 试剂与培养基 　　平板计数琼脂、营养肉汤、BHI肉汤、Baird- Parker培养基、卵黄亚碲酸钾增菌剂均购于北京陆桥技术有限责任公司；PetrifilmTM金黄色葡萄球菌快速检验测试片购于美国3M公司；Baird-Parker+RPF（兔血浆）购于梅里埃公司。 　　1.1.2 实验菌株 　　金黄色葡萄菌，阪崎肠杆菌购于北京陆桥有限责任公司，大肠杆菌，蜡样芽孢杆菌，伤寒杆菌来自本实验室保存的菌种。 　　1.1.3 样品 　　分批次采集临桂区农贸市场、超市食品100份，其中生肉类25份，熟肉制品21份，水产品15份，生鲜乳20份，冷食菜19份。 　　1.2 检测方法[2-3] 　　1.2.1 选择性鉴定实验 　　将5株实验菌过夜培养的肉汤培养物以生理盐水作10倍系列稀释，选择合适菌浓度分别涂布Baird-Parker平板和Baird-Parker+RPF平板，取1ml接种PetrifilmTM测试片，使最终菌液在各培养基浓度约100～1000cfu/ml，36℃培养24～48h，观察各菌株的典型生长情况。 　　1.2.2 敏感性实验 　　取标准金葡菌菌株实验菌液以生理盐水作10倍系列稀释，选择各稀释度菌液，Baird- Parker法、纸片法分别按BG/T4789.37-2008中第一法和第三法接种，Baird-Parker+RPF法按生产商使用说明用平板倾注法接种，同时以平板计数琼脂倾注法计算含菌量作对照。 　　1.2.3 食品中检测应用 　　同一检测样品以无菌生理盐水作10倍系列稀释后，选择适当稀释度分别按3种检测方法接种，Baird-Parker法、纸片法分别按BG/T4789.37-2008中第一法和第三法接种，Baird-Parker+RPF法按生产商使用说明用平板倾注法接种，直接计数样品中金黄色葡萄球菌cfu/g （ml）。 　　1.3 统计学方法 　　数据的分析采用SPSS18.0统计软件，计数资料的率的组间比较采用检验或Fisher确切概率法，以P0.05为差异具有统计学意义；三组间计数资料率的两两比较采用Bonferroni法调整检验水准，以P0.0167为差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 3种金黄色葡萄球菌检测方法选择性鉴定实验结果比较 　　如表1所示，金黄色葡萄球菌在3种检测方法的培养基中均有生长且菌落特征明显，蜡样芽孢杆菌在3种检测方法的培养基中也均有生长，但菌落特征不明显，阪崎肠杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌均未在3种检测方法的培养基中有