一种甲壳素制备水溶性羧甲基壳聚糖方法.docVIP

一种甲壳素制备水溶性羧甲基壳聚糖的方法 　　【摘要】本文研究了在碱性条件下，以乙醇为溶剂，用氯乙酸对甲壳素进行化学改性，合成了具有良好水溶性的羧甲基壳聚糖，粗产品用乙醇提纯，产物取代度在90%以上，脱乙酰度可达80%以上。 　　【关键词】甲壳素；羧甲基壳聚糖；水溶性；取代度；脱乙酰度 　　1、前言 　　甲壳素，又称甲壳质、几丁质，β-（1-4）-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖，是自然界第二位丰富的资源。普遍存在于虾蟹外壳、节肢动物、真菌细胞壁及某些植物细胞壁之中，每年自然界生物体内合成的甲壳素达斤百亿吨。但由于甲壳素不溶于水和普通溶剂，使得其应用性受到限制。对甲壳素进行化学改性可增加水溶性，并使功能性质如乳化性、增稠性等得到改善和提高。在众多的改性反应类型中，羧甲基化反应是研究较多的一种。 　　羧甲基壳聚糖是壳聚糖经羧甲基化后的衍生物，它同时具备水溶性和pH敏感性，是制备生物凝胶材料的优良原料，一般由壳聚糖直接制备，目前未见由甲壳素制备羧甲基壳聚糖的相关报道，本文以氢氧化钠、氯乙酸在乙醇溶剂中制备的水溶性羧甲基壳聚糖其取代度在90%以上，脱乙酰度可达75%以上。 　　2、试验部分 　　2.1材料与方法 　　2.1.1材料 　　甲壳素：青岛云宙生物科技有限公司 　　2.1.2仪器 　　PHS-3C型酸度计、NDJ-1型旋转粘度计、电子天平、恒速强力电动搅拌器、恒温水浴锅 　　2.2实验方法 　　2.2.1纯化 　　称取10g甲壳素粉于500ml的烧杯中，加入1.0mol/L的NaOH 200ml，搅拌3h后抽滤，除去杂质及残余蛋白。 　　2.2.2碱化 　　配制50%的（W/W）氢氧化钠溶液100g，加入到反应器中，与纯化后的甲壳素搅拌均匀，混合1h。 　　2.2.3冷冻溶胀 　　将碱化后的样品存放于-20℃的冰箱中，冷冻24h之后，室温解冻。 　　2.2.4羧甲基化 　　称取35g氯乙酸，在搅拌状态下缓慢滴加至碱化甲壳素中，控制反应温度不超过60℃，反应约3h，保温搅拌5h，制得粗产品。 　　2.2.5羧甲基壳聚糖的分离提纯 　　把粗产品用75%的乙醇溶液洗涤2次之后，除去氯化钠、二甘醇酸等杂质，洗去杂质的粗产品用醋酸调至pH为中性，乙醇脱水，抽滤后于50～70℃干燥，得产品。 　　2.2.6检测 　　将产品称重，计算产率； 　　检测产品的水溶性，动力粘度、取代度和脱乙酰度。 　　2.3产品理化性质的检测方法 　　2.3.1取代度（D.S）及脱乙酰度（D.D）的测定 　　采用电位滴定法，称取约100mg20-084，精密称定，加入0.3mol/L盐酸溶液15ml，搅拌至完全溶解，搅拌下用0.1mol/L标准氢氧化钠滴定液滴定，数字式酸度计指示溶液pH值变化，记录氢氧化钠滴定液滴定体积与pH值的对应关系，直到pH值大于11时终止滴定，用一阶微商法找出三个突跃点。为保证读数准确，每次滴加需隔一定时间，利用滴定曲线来计算取代度。计算公式如下： 　　2.3.2动力粘度的测定 　　称取样品适量，配制成1%的水溶液，搅拌至完全溶解，用NDJ-1型旋转式粘度计测定其粘度数值。 　　2.3.3水溶性的测定 　　称取样品适量，用水配成1%的溶液，间歇搅拌，室温放置24小时，应完全溶解。 　　3、结果与讨论 　　3.1结果 　　所得产品为白色粉末状，分散性良好，24小时内能全部溶于水，无肉眼可见杂质；产品质量12.85g，产率128.5%，动力粘度：29.5mPa?S，取代度96.4%，脱乙酰度82.8%。 　　3.2反应条件对产物结构的影响 　　由检测结果可以看出在强碱性条件下，甲壳素在氯乙酸的作用下羧甲基化的过程中同时脱掉乙酰基成为壳聚糖，控制各反应条件即可得到可溶性的羧甲基壳聚糖，但是浸碱浓度、温度、试剂用量和反应时间等条件不同对产物的各项指标均有影响， 可得到不同取代位置的产物。 　　3.2.1浸碱浓度对产物的影响 　　甲壳素及其衍生物都是高分子化合物，具有较高的晶区，浸碱及冷冻是为了更好的使反应试剂进入到晶区，有利于羧甲基化的进行，因此，碱液的浓度是反应进行的前提，当碱浓度在40%以上，反应才能顺利进行，碱用量增大，产品的水溶性较好，但是动力粘度降低，这是因为在强碱性条件下，降解速度加快；碱用量减少虽可保证一定的粘度，但是羧甲基化反应不彻底，产物水溶性变差，而且部分产物在提纯前会发生溶解情况，实验证明，50%浓度的碱液得到的产物溶解性较好，粘度也较高。 　　3.2.2浸碱时间对产物的影响 　　碱化时间同浸碱浓度一样会影响产物的粘度，浸碱时间短，产品粘度高，随着浸碱时间的延长，产物的粘度会降低，一般选择1～2小时为宜。 　　3.2.3氯乙酸的用量