两种血管外膜成纤维细胞培养方法比较与经验总结.docVIP

两种血管外膜成纤维细胞培养方法的比较与经验总结 　　[摘要] 目的 比较两种血管外膜成纤维细胞（AFs）培养方法的差异并总结经验。 方法 获取大鼠主动脉血管外膜组织，切成小块，一部分采用组织贴块法进行原代培养，另一部分使用消化酶消化获取细胞，使用相差显微镜观察细胞形态、免疫组化鉴定细胞内特定蛋白表达、细胞计数计算生长曲线等实验手段，并比较两种方法之间的差异。 结果 贴块法和消化法均能成功获得AFs；经免疫组化检测，两种方法所获的细胞波形蛋白（Vimentin）表达阳性/ a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）表达阴性，证实培养的细胞为AFs。两种方法获得的细胞在细胞增殖期、对数生长期和平台期的时间大致相同，二者的生长、增殖比较，差异无统计学意义（P 0.05 ）。 结论 贴块法和消化法均能成功培养AFs，所获得的细胞性状稳定、存活率高，可在体外稳定地传代培养，在血管重构研究领域具有应用价值。 　　[关键词] 血管外膜成纤维细胞； 组织贴块法； 消化法；经验总结 　　[中图分类号] R322.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）08（b）-0004-05 　　[Abstract] Objective To compare the differences of two methods in adventitial fibroblasts cultu