断面特征气味.PPT

制片方法： 首先要根据显微观察的不同目的制作不同的制片，例如要： ①观察组织构造：通常使用的切片方法有：徒手切片法：通常将选择好的材料两端切齐，以左手持材料，右手持刀片，从左前向右后水平切割材料（切片时随时以水湿润刀口），将切片以毛笔扫入盛水的平皿中，然后从切片中挑选较好者制片，以备显微观察。 此法适合较幼嫩的地下器官、嫩茎、较粗的叶柄、较幼嫩的果实、种子等器官。也可用两片双面刀片并齐，在桌面上或硬的支撑物上下切，可获得薄厚理想的切片（适合薄的材料，如叶片、花的各部等）。 滑走切片法:利用滑走切片机代替徒手切片的一种方法。适合较坚硬、较粗大的材料。通常将选择好的材料固定于切片机上，调整好厚薄（0－50微米）就可以切片。同样将切片置于水中，挑选较薄的进行制片观察。 石蜡制片法； 附页： ⒈石蜡制片技术： 石蜡制片又叫永久制片，是观察植物组织构造常用的制片方法之一。其优点主要是适合各种植物组织的制片，切片的厚薄易于控制（最薄可达0.5微米），清晰度很好，亦适合作细胞学研究，并能够制成连续切片，制片易于长久保存，易于交流等。但制片周期较长，易受条件限制，制片中使用化学试剂较多，对人有一定毒害，易使材料变脆、变硬或变形，某些内含物易于消失，常使组织变小，甚至使组织扭转变形，细胞所含物质缩小而折光性增强，影响观察正确性，且制片成本较高等。虽然这样，但是石蜡制片仍不失为一种很好的制片方法，被人们常采用。 主要的基础理论和技术方法： 首先要明确,在这种条件下,植物的组织或部位不能直接用来切片,首先要按照该方法的要求,将材料进行程序化处理,终究要让所起填充作用的石蜡进入到材料的细胞中,然后带石蜡在切片机上进行切片,再染色、封藏。这样的程序中，中间过程是十分复杂的，往往随材料的不同，而方法有所不同，在实际工作中要不断地摸索,不断地总结,只有这样,才有可能做出好的片子。 选择切片材料是全部切片工作的第一步，如果选择的材料不适当或有错误，以后的工作将是没有意义的。选择材料时要注意具有代表性,植物的器官或器官的某一部位,其组织构造往往能够代表整个器官的基本情况,但不同部位,即便是同一器官,其组织构造,亦有一定的过渡差异,通常在选择材料时,要注意选择器官靠中间的部位作为试验材料,当然如果是作生长发育观察,则另当别论。因此选好试验材料，对于整个实验至关重要。 当选择好材料后，实验的主要过程有以下步骤： 材料的固定或软化——冲洗——脱水——透明——浸蜡——包埋——切片——贴片——烘片——脱蜡—— 二重染色——封片。 ⒉制片程序简介： a.材料的固定或软化： 最好用新鲜的固定材料（新鲜材料可迅速杀死植物细胞，并可最大程度保持组织和细胞的自然状态，这就是所说的杀死和固定）。 干材料可先行软化（常用温水浸泡，勤换水，勿使材料腐烂）。 一种固定液兼有杀死和固定双重作用，固定液能否迅速渗透于组织中，既与固定液本身的穿透能力有关，也因组织的致密程度有关，因此要根据材料的情况选择固定液，一般的固定液中，FAA固定液的作用较快（叶类材料至少4小时，或8－24小时、木类材料3天－一周），而含有铬酸的固定液作用较慢（叶类材料至少8小时，木类材料一周以上，期间最好更换一项固定液）。组织细胞的杀死和固定是同时发生的。 所谓杀死是指在很短的时间内终止细胞的生命力；固定是指在杀死的同时，保存了组织细胞的构造基本上没有改变，其目的有一下几点：①防止组织细胞中细菌和酶的活动而引起霉烂。②减少组织细胞在以后程序中的收缩和变形。③植物细胞在生活状态下，有些结构模糊不清，经固定使各部分结构清晰可辨。④经过固定的材料，组织细胞容易着色。 b.冲洗： 若为固定的材料，制片前用流水冲洗直至固定液被彻底置换干净。水溶性固定液要用水洗，特别是含有铬酸的固定液应用流水冲洗，醇溶性固定液，应以固定液中酒精浓度相等或相近的酒精洗涤。 流水冲洗时以慢速流水进行冲洗，切忌流速太快使材料上下翻飞而使材料损坏；用酒精混合固定液固定的材料，用同浓度的酒精溶液更换洗涤；固定液中含有苦味酸，无论它是水溶性还是酒精溶液，一定要用酒精溶液洗涤；含有铬酸或其它金属离子的材料可流水冲洗4－24小时，以彻底清除金属离子。 c.脱水： 经过冲洗或软化的材料，因组织内含有大量的水分，在以下的步骤中会有干扰，故须将水脱干净。通常预先配制好从10%—100%的梯度酒精溶液，在一定时间范围内逐级置换. 注：梯度、时间要视材料的性质而定，不能一概而论，直至到达100%的酒精两次。 梯度酒精脱水时间可按材料的大小、质地情况而定，如较幼嫩的根及根茎、茎、叶等材料，在70％以下浓度的酒精，一