乳腺浸润性导管癌COX―2表达及临床意义.docVIP

乳腺浸润性导管癌COX―2的表达及临床意义 　　【摘 要】 目的 探讨COX-2在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法 采用Elisa方法检测65例单侧乳腺浸润性导管癌患者组织及癌旁组织中COX-2及炎症因子（TNF-α、IL-1β）的表达，并分析COX-2的表达与乳腺浸润性导管癌患者临床病理特征的关系。结果 ① 在65例乳腺浸润性导管癌病理组织中，COX-2蛋白阳性表达率均高于其在癌旁组织及乳腺良性肿瘤中的阳性表达率，两者之间存在显著性差异（P〈0.01）；② COX-2的表达与区域淋巴结转移、组织细胞学分级和TNM分期成正相关（P〈0.05）；与患者年龄、肿瘤大小及ER、PR的表达无明显相关性。 ③ 乳腺浸润性导管癌病理组织中COX-2的表达与炎症因子（TNF-α、IL-1β）的表达成正相关，TNF-α及IL-1β在乳腺浸润性导管癌病理组织中亦呈现高表达（P〈0.01）。结论 在乳腺浸润性导管癌组织中COX-2的表达增高与其临床病理特征密切相关；COX-2的过表达伴随着相关炎症因子TNF-α、IL-1β的表达增高，表明COX-2除了在促进乳腺浸润性导管癌肿瘤细胞增殖及迁徙方面发挥了重要作用，同时也说明其在促进炎症因子参与肿瘤发生发展中起到关键作用。 　　【关键词】 COX-2 乳腺浸润性导管癌 临床病理特征 炎症因子 　　1 材料与方法 　　1.1 标本 　　收集江苏省常州市xxx医院201x年x月至201x年x月行单侧乳腺癌根治术患者，且组织病理类型确诊为乳腺浸润性导管癌病理组织共65例；16例良性乳腺疾病术后组织标本作为阴性对照。患者均为女性，发病年龄为29-77岁，中位年龄53岁。依据2009年美国癌症联合会（AJCC）修订的乳腺癌分期第7版标准，进行TNM分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期32例，Ⅲ期18例。肿瘤最大直径小于2cm者28例，大于2cm者37例。伴有腋窝淋巴结转移22例，无腋窝淋巴结转移43例。组织细胞学分级：Ⅰ级12例，Ⅱ级33例，Ⅲ级20例。术前均未经放、化疗及内分泌治疗。距离肿瘤组织周边2-5cm组织且经病理学证实该组织中存在散在癌细胞为癌旁组织。 　　1.2 检测试剂 　　蛋白质抽提所需试剂，如Tris-base、SDS、β-巯基乙醇等均购自SIGMA公司；检测COX-2、TNF-α、IL-1β及ER、PR所需ELISA试剂盒均购自上海麦约尔生物技术有限公司。 　　1.3 实验方法 　　取术后病人新鲜组织标本约50mg，于灭菌的1.5ML Eppendorf管中，先加入500uL蛋白抽提液后用碾磨棒充分碾碎组织至看不见组织碎块，然后补充蛋白抽提液至800uL混匀，冰上静置10分钟，10000rpm离心10分钟后取上清至另一灭菌的1.5ML Eppendorf管中，重复上述步骤一次，即获得所需细胞提取上清，以备Elisa检测上清中的COX-2、TNF-α、IL-1β及ER、PR蛋白表达。 　　依据Elisa试剂盒中的实验方法，将按照上述方法提取的乳腺浸润性导管癌组织及癌旁组织、乳腺良性肿瘤组织上清加入已经包被了COX-2、TNF-α、IL-1β及ER、PR相应抗体的96孔板中，检测COX-2及各指标之间的蛋白表达水平。 　　1.4 组织细胞学分级标准 　　根据2011年NCCN乳腺癌临床实践指南推荐使用Nottingham联合组织学分级（Nottingham Combined Histology Grade， Scarff-bloom-Richardson分级系统的Elston-Ellis修正版），分为3级。 　　1.5 统计学方法 　　应用SPSS17.0统计软件包进行数据分析。两样本均数比较采用t检验；2个分类变量之间有无关联性采用χ2 检验；2个独立样本等级强度差别采用Wilcoxon秩和检验；多个独立样本比较采用Kruskal-Wallis H检验。检验水准为α=0.05。 　　2 结果 　　2.1 乳腺浸润性导管癌及癌旁组织、乳腺良性肿瘤COX-2的表达 　　与乳腺良性肿瘤组织相比，COX-2在乳腺浸润性导管癌组织呈现高表达（P〈0.01），在癌旁组织中的表达水平介于乳腺良性肿瘤和导管癌之间，但存在周围淋巴结转移的癌旁组织中COX-2的表达明显高于无淋巴转移的癌旁组织，两者之间亦存在统计学差异；然而无淋巴转移癌旁组织与乳腺良性肿瘤，及有淋巴转移癌旁组织与乳腺浸润性导管癌两者之间COX-2的表达不存在统计学差异。其表达量的高低与肿瘤组织大小并无相关性，却与导管癌的区域淋巴结转移成正相关（图1）。 　　Elisa检测乳腺浸润性导管癌组织中COX-2的蛋白表达水平。如图1所示，与有淋巴转移的导管癌癌旁组织相比，乳腺浸润性导管癌组织中COX-2的表达较高，但两者