人基因治疗探究跟制剂质量控制技术指导原则.pdfVIP

人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则 一、引言 基因治疗是指改变细胞遗传物质为基础的医学治疗。目前仅限于体细胞。 基因治疗的技术和方式日趋多样性。按基因导入的形式，分为体外基因导入 （exvivo）及体内基因导入（invivo）两种形式。前者是在体外将基因导入人细 胞，然后将该细胞注入人体。其制品形式是外源基因转化的细胞，适合在具有专 门技术人才和GMP条件的医疗单位进行。后者则是将基因通过适当的导入系统直 接导入人体，包括病毒的与非病毒的方法。其制品形式是基因工程技术改造的病 毒或者是重组DNA、或者是DNA复（混）合物。基因治疗制剂种类较多，因此， 本指导原则不可能用一个模式来概括，只能提出一个共同的原则，具体的方案应 根据这些原则，确定研究技术路线。其基本原则：一是必须确保安全与有效，要 充分估计可能遇到的风险，并提出相应的质控要求；二是要促进基因治疗的研究， 并加强创新。对一些新的治疗技术路线的相应质控要求，可有一定的灵活性，应 注意到基因治疗本身的特点以及它与经典的化学合成药物或基因工程药物的差 别。目前，一些基因治疗研究相对比较成熟，而一些则不够完善，更加要求研究 者在使用该技术指导原则时不可生搬硬套。为此，研究者应加强咨询和论证，提 出一个科学可行的研究方案，最终获得确保安全有效的基因治疗制品。 在向国家药品监督管理局申报临床试验时，除须按本指导原则中研究内容 和制品质量控制准备材料外，同时需提供下述材料： （1）国内外研究现状和进展（综述）。包括： 1．所用基因的研究现状和进展； 2．所用载体的研究现状和进展； 3．所用基因导入系统和方法的研究现状和进展； 4．该研究或制品相关的体外有效性实验资料； 5．该研究或制品相关的动物试验安全性和有效性资料； 6．该研究或制品相关的临床试验安全性和有效性资料； 7．该研究或制品的生产工艺现状； 8．该研究或制品的质量控制现状； 9．本研究或制品的先进性和创新点； 10．本研究或制品产业化的可行性。综述内容须科学客观。 （二）本研究或制品的知识产权情况。包括：1）本研究或制品的知识产权 情况阐述；2）本研究或制品的知识产权检索报告和检索结果。知识产权情况的 阐述和检索应包括所用基因、载体、重组体、终产品的其它成分、生产用细胞和 生产工艺等。 二、研究内容和制品质量控制 （一）DNA重组体或基因导入系统的构建 1．治疗用的目的基因 详细说明基因治疗所用的目的基因及其来源（尤其是有否涉及国内外专利问 题，应有专利查询资料），获得目的基因的材料方法和基因鉴定结果。 2．载体 包括载体DNA的限制性内切酶图谱或基因库资料。若有特殊的元件，如启动 子、增强子及PolyA位点等，应提供详细资料。若有改变结构（如丢失片段，点 突变或插入片段），须提供DNA测序结果。若属新的或改变结构的病毒载体，须 提供组建的材料、方法、组建步骤及鉴定结果的全部资料。 非病毒型基因导入系统，均需一个能在人体细胞表达目的基因的质粒。除裸 露DNA外，还须附加其它的组分进行加工，如脂质体、多肽、金属颗粒等。本指 导原则不包括寡聚核苷酸（如AntisenseRNA,Ribozyme,RNAi等）类基因治疗制 品。 3．DNA重组体 详细说明克隆步骤，材料方法；DNA序列分析图谱和结果，注明启动子、增强子、 插入顺序、目的基因及polyA顺序等；重组体的限制性酶切图谱和鉴定结果；重 组体中基因表达水平和时程。 4．基因导入系统构建包括病毒载体与非病毒载体基因导入系统。 （1）病毒载体基因导入系统包括腺病毒载体、逆转录病毒载体和腺相关病 毒载体基因导入系统等。需详细描述形成单克隆原始病毒颗粒的方法、材料、技 术路线和全部的鉴定方法、标准和结果。这些鉴定一般包括：结构鉴定（限制性 酶切图谱和PCR分析）、整个病毒的序列分析（≤40kb），基因体外表达和生物 活性，SDS、表达盒DNA序列分析、Westernblot分析、转染效率、透射电 镜负染法观察、复制型病毒的检测和其它污染因子的检测。 （2）非病毒基因导入系统除裸DNA外，一般包括两个部分：一是哺乳动物 细胞表达载体；二是其它载体物质，如脂质体、多肽或金属粒子等。为此，需说 明目的基因导入系统的性质与内容。由于部分病人对青霉素的过敏反应，最好不 用耐氨苄青霉素基因作耐药基因，而