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体外培养条件下不同氧浓度对几种细胞生长的影响 　　摘 要 观察多级氧浓度对体外培养条件下小鼠原代骨髓基质细胞、小鼠3T3-L1前脂细胞及大鼠BRL肝细胞生长的影响，探究不同类型细胞体外增殖的最佳O2体积分数以及对低氧和高氧耐受力的差异.实验结果显示，在10%～18%O2范围内骨髓基质细胞增殖最快、活力最强，而3T3-L1前脂细胞及BRL肝细胞生长的最适O2体积分数为5%.O2浓度过低严重损害这几种细胞在培养下的生存能力，O2浓度过高有致死性毒性作用.这些结果表明，原代与长期传代细胞最佳生长的适宜氧浓度有一定的差异，对低氧和高氧的耐受力也强弱不同. 　　关键词 氧浓度；细胞培养；增殖；细胞活力 　　中图分类号 Q256 文献标识码 A 文章编号 1000-2537（2014）06-0013-06 　　Abstract The effects of various oxygen concentrations on population growth of mouse bone-marrow primary stromal cells， murine 3T3-L1 preadipocytes and rat BRL hepatocytes during the 48 h-culture period were examined in order to explore the optimal oxygen concentration and difference in tolerance limits to hypoxia and hyperoxia for cell proliferation in vitro. The results show that the primary stromal cells had the highest proliferative activity and greatest viability at oxygen concentrations of 10% and 18%， while 3T3-L1 preadipocytes and rat BRL hepatocytes did at oxygen concentration of 5%. Too low oxygen greatly impaired survival of these cell types， and too high oxygen exerted lethal toxicity on them. These data suggest that the primary cells and the immortal cell lines require different concentrations of oxygen for their optimal growth， and they have different tolerance limits to hypoxia and hyperoxia as well. 　　Key words oxygen concentration； cell culture； proliferation； cell viability 　　氧是细胞生存的必要条件之一，也是细胞生物学行为和生理功能的一种重要调节因子[1-2].细胞在体外培养下的生存和生长也必须有适宜的氧浓度，细胞培养本身又是研究氧生物学作用的重要方法.然而，多种细胞体外培养所需的最适氧浓度还不确定，不同氧浓度对细胞的作用及其机制尚不完全清楚.细胞的类型和机能状态、技术条件等因素都可影响细胞对氧浓度变化的反应[3-5].本文利用作者所在实验室建立的细胞体外培养的一种新方法，研究不同氧浓度对几种原代和传代细胞生长的影响，为体外细胞培养最适氧体积分数的选择和与氧相关细胞病理及生理的深入研究提供参考. 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物和细胞系 　　昆明种小鼠，雌雄不限，4周龄，体重18～22 g，购于中南大学实验动物学部；小鼠前脂细胞3T3-L1系和大鼠肝细胞BRL系分别由本院心脏发育研究室和衰老生物化学研究室惠赠. 　　1.2 主要试剂 　　DMEM培养基为Invitrogen-Gibco公司产品，胎牛血清（FBS）购自杭州四季青生物公司，二甲基亚砜（DMSO）、四甲基偶氮唑盐（MTT）和胰蛋白酶（typsin）为Sigma产品. 　　13 方法 　　1.3.1 骨髓基质细胞的原代培养 颈椎脱臼法处死小鼠，无菌条件下分离出股骨和胫骨，用DMEM培养液冲出骨髓.依次用6、5、4号针头吸打冲出的骨髓，制成单细胞悬液，作有核细胞计数.骨髓有核细胞于20%（体积分数）FBS的DMEM培养液中，以1×107