宁波市设施蔬菜灰霉病菌对2种杀菌剂的抗性检测.docVIP

宁波市设施蔬菜灰霉病菌对2种杀菌剂的抗性检测 　　摘要：为明确宁波市设施蔬菜灰霉病菌的抗药性现状，采用菌丝生长速率法测定了宁波市6个不同地区共46个菌株对腐霉利和嘧霉胺2种常规防治药剂的抗药性。试验结果表明，测试的灰霉病菌对腐霉利已产生了很高的抗性，整体抗性频率为80.43%，高抗频率为22.84%，对嘧霉胺的抗性则相对较低，整体抗性频率为34.78%，高抗频率为1.67%；不同地区间灰霉病菌的抗药性差异较大，6个地区以镇海的抗药性最为严重，慈溪、鄞州两地的抗药性则相对较轻。结果还发现，部分灰霉病菌株对腐霉利和嘧菌胺2种杀菌剂产生了双重抗性，镇海的双重抗性频率最高，达到了60%。为此，在设施蔬菜生产上应合理更换并交替使用与此2种药剂无交互抗性的药剂，以有效控制灰霉病。 　　关键词：设施蔬菜；灰霉病菌；腐霉利；嘧霉胺；抗药性 　　中图分类号：S436.3 文献标识码：A 文章编号：1001-3547（2016）04-0082-03 　　灰霉病病原菌为灰葡萄孢（Botrytis cinerea Pers.），可为害黄瓜、番茄、茄子、甜椒、韭菜、莴苣、洋葱等多种蔬菜作物，发生范围广，为害十分严重，给蔬菜生产造成了很大损失。近年来，该病在宁波市设施蔬菜产区发生普遍。目前控制该病害仍以化学药剂防治为主，但因灰霉病菌具有繁殖速率高、遗传变异大和适合度高等特性，长期连续大量用药使得灰霉病菌对多种主要防治药剂产生了抗药性，甚至出现了多重抗药性。腐霉利和嘧霉胺是宁波市在蔬菜生产上用于防治灰霉病的主要常规防治药剂，随着这2种药剂的连续大量频繁使用，灰霉病菌对二者产生不同程度的抗性，防治效果逐年下降。灰霉病菌的抗药性检测是一项普通的日常性工作，但其对后续的病害防治用药指导具有十分重要的作用，虽然已经有不少类似的研究，但是不同地区的病菌抗药性不同。即便同一地区，随着时间的发展，病菌的抗药性也会发生变化。本研究的目的在于通过对当前宁波地区灰霉病菌对腐霉利和嘧霉胺2种杀菌剂的抗药性的检测，以明确宁波市当前灰霉病菌的抗药性现状，为设施蔬菜灰霉病的田间用药和综合防治提供理论依据。 　　1料与方法 　　1.1试验材料 　　①供试菌株 a.菌株采集与分离。从宁波市慈溪、镇海、鄞州、宁海、象山、奉化6地设施蔬菜上采集并分离纯化得到灰霉病菌株46个，用PDA斜面培养基保存到4℃冰箱中备用。 　　b.敏感菌株。黄瓜灰霉病菌，来源于浙江省化工研究院。 　　②供试药剂与培养基 a.供试药剂。50%腐霉利可湿性粉剂，商品名速克灵，日本住友化学工业株式会社生产；40%嘧霉胺悬浮剂，商品名施佳乐，拜耳作物科学公司生产。 　　b.培养基。菌株分离培养和腐霉利抗药性测定采用PDA培养基，嘧霉胺测定培养基按Chapenland等目的方法：葡萄糖10g、琼脂15 g、KH2PO42 g、K2HP415g、MgSO4?7H2O5 g、（NH4）2SO4 1 g，加水至1000 mL。 　　1.2试验方法 　　灰霉病菌的抗药性测定采用FAO推荐的菌落直径法（菌丝生长速率法），即测定抑制菌丝生长50%时杀菌剂的有效抑制中浓度（EC50），分别测定敏感菌和各地菌株的EC50。各菌株先在PDA平板上活化培养5 d，然后在同一圆周上取直径0.5 cm的菌丝块并转移到含系列质量浓度的培养基平板中央，25℃恒温箱中黑暗培养3 d后测量各菌落直径（cm），取平均值计算药剂对菌丝生长的抑制率（%）。利用DPS软件，通过浓度对数值（x）与抑制率几率值（y）之间的线性回归关系，求出毒力回归方程和有效抑制中浓度（EC50）。依据纪明山等的判定方法根据各地菌株EC50值与敏感菌EC50值的倍数进行抗性水平判定，即测试菌株的EC50值为敏感菌株的5倍以下为敏感（S），5～10倍为低抗（LR），10～40倍为中抗（MR），40倍以上为高抗（HR）。根据判定结果分析各地菌株抗性频率、抗性表型比例及同时对两种药剂产生抗性的双重抗性频率，抗性频率（%）=抗性菌株数/总菌株数×100%；抗性表型比例（%）=各抗性表型菌株数/总菌株数×100%；双重抗性频率（%）=双重抗性菌株数/决菌株数×100%。 　　2结果与分析 　　2.1灰霉病菌对腐霉利和嘧霉胺的抗性频率 　　从图1可以看出，所测定的设施蔬菜灰霉病菌对腐霉利和嘧霉胺均产生了不同程度的抗药性，其中对腐霉利已产生了严重的抗性，其抗性频率达到50%以上，而对嘧霉胺的抗性频率则相对较低，除镇海菌株达到60%外，其余各地抗性频率均在40%以下。从不同的地区菌株抗性频率差异来看，镇海区灰霉病菌株对2种杀菌剂的抗性频率均最高，慈溪菌株对腐霉利的抗性频率最低，而宁海菌株对嘧霉胺的抗性频率最低，仅为16.67%。 　　2.2灰霉病菌对腐霉利和嘧霉胺的抗