兔耳创伤后创面早期外用干扰素与法舒地尔预防瘢痕增生实验研究.docVIP

兔耳创伤后创面早期外用干扰素与法舒地尔预防瘢痕增生实验研究 　　[摘要]目的：本实验观察兔耳创伤后创面立即外用干扰素与法舒地尔预防瘢痕增生的疗效。方法：选择健康的新西兰大耳白兔，制作兔耳创伤模型48只，随机分为A，B，C三组，每组16只共计32个创面，A组外用干扰素霜，B组外用法舒地尔霜，C组为生理盐水对照组。术后第一天起用药至4周后兔耳上皮化，切取瘢痕组织计算瘢痕增生指数，观察masson染色胶原纤维的形态分布及成纤维细胞数量。结果：A组与B组之间差异有统计学意义（P0.05），A组与C组、B组与C组之间差异皆具有统计学意义，差异显著（P0.01）。结论：兔耳创伤后创面立即外用干扰素与法舒地尔能有效预防抑制瘢痕增生。 　　[关键词]干扰素；法舒地尔；创伤；成纤维细胞；增生性瘢痕；实验研究 　　[中图分类号]R619+.6 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2017）03-0074-03 　　增生性瘢痕是整形外科研究的难点和热点，临床治疗较为困难，一般采用手术切除辅以其它方法如药物注射、激光、按摩、加压、硅凝胶膜等。经临床证实如干扰素，钙通道阻滞剂等药物较为有效。Lee，京萨等通过一系列研究证实肌注或者外用钙通道阻滞剂均能有效抑制兔耳瘢痕增生。依此，本实验利用兔耳作为瘢痕模型，对兔耳创伤后即用干扰素与法舒地尔至创面上皮化愈合，观察其预防抑制瘢痕增生的疗效。 　　1材料和方法 　　1.1实验动物：本实验兔48只由雅安职业技术学院实验中心提供，兔龄8～12个月，兔耳完好，雌雄不计，体重为2.0～2.5kg。 　　1.2实验仪器和试剂：实验所需手术的器械由雅安职业技术学院动物实验中心提供，相机（自备），干扰素（北京凯英科技有限公司），盐酸法舒地尔（成都华宇制药有限公司），0.9%氯化钠注射液（成都青山利康药业有限公司）。 　　1.3创伤模型的制作：依据李荟元研究设计的瘢痕模型制作方法，将兔耳腹侧全层皮肤去除1.5cm×1.5cm，并刮除其软骨膜。 　　1.4实验动物分组：将48只实验兔随机分成3组，每组16只，每只兔耳造模一个共创伤模型32个。实验组A组外用干扰素α-2b（将凡士林99g加1g干扰素α-2b注射液，制成1%的干扰素α-2b霜），B组外用法舒地尔（将凡士林99g加1g法舒地尔注射液，制成1%的法舒地尔霜），C组生理盐水为对照组（将凡士林99g加1g无菌生理盐水，制成1%的生理盐水霜）。 　　1.5用药方法：术后第1天，A组外用干扰素α-2b霜每日1次均匀薄层涂抹在创面上，至兔耳上皮化愈合共计4周。B组每日1次外用法舒地尔霜与C组每日1次生理盐水霜，至兔耳上皮化愈合共4周。 　　1.6标本切取及处理：实验第29天处死实验动物，在严格无菌条件下切取兔耳标本，带有部分正常皮肤软组织和软骨膜。10%的甲醛溶液固标本定，石蜡包埋，进行HE染色和Msson染色。 　　2观察指标 　　2.1大体方面观察：每天观察并拍照记录创面肉芽生长、创面愈合后瘢痕形成情况如：组织的颜色、质地、大小、厚度等。分别在实验第7天、14天、28天记录数据并分析，在第28天时创面上皮化，大体表现：根据温哥华瘢痕评分标准记录评分。 　　2.2瘢痕增生指数（HI）测量：在低倍镜下测微尺测出正常皮肤表面至软骨表面的厚度b，测出瘢痕表面至软骨表面的厚度a，依据Morris等提出的瘢痕增生指数HI=a/b即得出结果。 　　2.3成纤维细胞计数FBh在HE染色标本中，低倍显微镜下寻找显示最清楚、成纤维细胞数最多的区域，通过高倍镜下观察4个不重复的不同区域视野并目测计数，得到的结果取均数，此数即为该实验动物的成纤维细胞数目（Weidner法）。 　　3统计方法 　　本实验采用PASW Statistics18（SPSS18.0）软件进行统计分析，组间比较采用了t检验，并且按检验水准a=0.05，P0.05则差异无统计学意义，可认为实验组与对照组对瘢痕的预防抑制作用无明显差异。 　　4结果 　　4.1一般观察：实验第28天时，创面皆愈合形成瘢痕，干扰素和法舒地尔不影响创面的愈合，且愈合时间差异无统计学意义。实验A组：肉眼可见瘢痕不超过手术范围，瘢痕质地平软，颜色淡，斑块体积小；B组：瘢痕不超过手术范围，质地稍平软，颜色稍淡，斑块体积较小；C组：瘢痕增生高出皮肤表面但不超过手术范围，质地硬，颜色红，瘢痕斑块体积大。 　　4.2 HE染色观察：A组、B组镜下可见创伤区表皮和真皮稍显增厚，细胞层次少，表皮的厚薄程度不均，瘢痕厚度略高于周围正常皮肤，瘢痕内可见呈梭形成纤维细胞和炎细胞；C组表皮和真皮增生明显，细胞层次明显增多，可见大量不规则的梭型成纤维细胞呈漩涡状，可见大量的成纤维细胞和炎细胞浸润。 　　4.3 Mass