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化妆品中铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）的检测 目的： 　1.了解化妆品中铜绿假单胞菌检测的基本过程。 　2.掌握几种培养基的配置方法。 　3.掌握铜绿假单胞菌的鉴定及生化特征。 原理： 铜绿假单胞菌为需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性杆菌，有鞭毛，在普通培养基上生长良好，菌落大小不一，平均直径2mm～3mm，扁平，边缘不整齐，且常呈相互融合状态。氧化酶阳性，能产生绿脓菌素，此外还能液化明胶，还原硝酸盐产生氮气，在42℃条件下可以生长，可与类似菌区别。 操作步骤 检样前化妆品的处理 接样于营养肉汤增菌，37℃，12h，140rpm培养 分离培养，挑取培养物接于十六烷基三甲基溴化铵平 板， 37℃，18-24h 染色镜检 配十六烷基三甲基溴化铵培养基（选择性培养基，大肠杆菌不能生长，革兰氏阳性菌生长完全受到抑制） 配绿脓菌素测定用培养基，明胶培养基，硝酸盐蛋白胨水培养基，普通琼脂斜面培养基 操作步骤 特征性检验 氧化酶 绿脓菌素 硝酸盐还原 明胶液化 42 ℃生长 试验 试验 产气试验 试验 试验 取菌+ 1滴 接菌，37 ℃ 接菌 接菌 接菌 二甲基对 24h +氯仿 37 ℃ 24h 37 ℃ 24h 42 ℃ 24h 苯二胺 移出+盐酸 紫红色（+） 紫红色（+） 有气体（+） 溶解成液状（+） 生长（+） 不变色（-） 不变色（-） 无气体（-） 未溶解（-） 不生长（-） 实验一 培养基的制备及细菌的分离培养　 实验目的 掌握培养基制备的原理和方法 掌握细菌的分离培养 了解灭菌方法 实验原理 操作步骤 操作步骤 1.绿脓菌素测定用培养基300ml 加热溶解 调pH 分装试管 高压 制成斜面 2.明胶培养基300ml 加热溶解 调pH 分装试管 高压 直立制成高层 3.硝酸盐蛋白胨水培养基300ml 加热溶解 调pH 分装有小倒管的试管 高压 直立制成高层 4.普通琼脂斜面培养基300ml 加热溶解 调pH 分装试管 高压 制成斜面 注意事项 培养基溶解时，加有琼脂的培养基易沸，应注意看守。 注意调节培养基的pH。 称牛肉膏用玻片，称甘油用小烧杯。 加热后应补足液量。 注意做好标记。 细菌的分离培养 原理： 通过划线，将混杂的细菌在平板表面逐一分散，经培养后，各自形成菌落(colony)。根据菌落形态、特征挑选单个菌落，移种培养后，即得到纯种细菌。 方法： 平板划线法有几种，可根据不同情况选用其中一种。 (1)平行划线法 此法适用于含菌不多的液体标本，如脑脊液(CSF)、腹水、分泌物、脓汁以及稀薄的菌液等。 ①左手斜持平板底，右手持接种环。接种环在火焰上灭菌，冷却后，沾取一接种环标本，先在平板的一端涂开，并从此处开始向下划密集的平行线，约占平板面积的一半。 ②将平板转180°角，从平板另一端开始也划密集的平行线，直到划满平板的剩余部分。 将平板底放入盖内，接种环火焰灭菌后放下，将平板倒置，37℃培养。 (2)分区划线法。此法适用于含菌多的检测标本，如粪便，喀痰、细菌固体培养物等。 ①划线前的操作同平行划线法。先在平板的一端将标本涂开并在平板的1/5～1/4面积上划密集的平行线，接种环火焰灭菌。 ②将平板转约70°角，待接种环冷却后，使接种环通过已划线的1区5～7次，以后即不与1区接触作连续密集划线，约占平板面积的1/4，接种环再通过火焰灭菌。 ③再转平板约70°，如上法在第3区划线，此后接种环不再灭菌。 ④重复上述操作在第4区划线，划满余下的培养基表面。将平板底放入盖内，接种环灭菌后放下，置37℃培养。