血吸虫病动物模型.PPT

血吸虫病动物模型 一、选用动物：小白鼠及家兔。 二、阳性钉螺：由浙江疾控中心提供。 三、逸出尾蚴条件：水温25-30度,2-3小时。 四、感染度：30条尾蚴/鼠,500条尾蚴/兔。 血吸虫病动物模型 操作步骤： 一、固定动物。 二、剪毛。 三、计数尾蚴。 四、感染动物(15-20分钟)。 五、除去盖玻片，干棉球擦干。 血吸虫病动物模型 注意事项： 一、固定动物时小心不要被咬伤。 二、剪毛要干净又不能剪掉皮肤。 三、尾蚴计数要准确。 四、感染时要注意观察，保持湿润、不掉玻片。 五、注意自我保护。 解剖、观察血吸虫动物模型 一、目的、要求： 1 .熟悉解剖小鼠方法。 2 .挑取血吸虫成虫(门静脉) 3 .观察病肝病理变化并压片镜检。 4 .取病肝准备做病理切片。 解剖、观察血吸虫动物模型 二、方法： 眼球取血： 处死小鼠： 剖腹、固定： 挑取成虫并观察： 观察肝脏并压片： 取肝脏并固定备用： 免疫学诊断技术 酶联免疫吸附试验 ( ELISA )： (一) 常规ELISA ： 1. 基本原理: 间接法, 酶标记技术。 2. 方法评价：是应用最普遍、适用范围最广的一种方泛。 3. 适用范围：用于很多寄生虫病的诊断。 血吸虫抗体ELISA检测 操作程序： 一、加样反应： 用样本稀释液（5号液）将待检血清样本按1:50稀释，然后每孔加已稀释血清样本100 μl (对照品不用稀释直接加）,37oC避光反应30分钟后，甩去孔内液体，每孔注满洗涤液洗涤3次，每次置60秒后甩去拍干。 二、加酶反应： 每孔加酶结合物（1号液）1滴，37oC避光反应30分钟后，甩去孔内液体。每孔注满洗涤液洗涤3次，每次置60秒后甩去拍干。 三、显色反应： 每孔加底物（3号液）和显色剂（4号液）各1滴，混匀， 37oC避光反应10分钟。加中止液（6号液） 1滴，混匀，终止反应。 血吸虫抗体ELISA检测 结果判断： 1、肉眼观察： 在白色背景下观察各孔显色反应。黄色表示阳性反应。 2、仪器判断： 以空白对照调零用酶标仪于450nm波长读取OD值。待检孔OD值大于阴性对照2.1倍者为阳性。 免疫学诊断技术 间接血凝试验 (IHA )： 基本原理: 用红细胞作载体，吸附抗原。 实验步骤：红细胞致敏 试验 结果判断 方法评价：方法简单、敏感性高、特异性强。 适用范围：用于某些寄生虫病的辅助诊断和流行病学调查。 血吸虫抗体IHA检测 1.配置致敏红细胞悬液：致敏红细胞一支加致敏红细胞稀释液1ml,充分混匀。 2. 加样：血凝板的第一孔加标本稀释液100μl,第2-4孔加标本稀释液25μl.于第一孔加25μl待测血清，充分混匀后吸出25μl于第二孔，依次倍比稀释至第四孔，第四孔混匀后弃去多余的25μl、第一孔弃去75μl. 3. 加至敏红细胞：每孔加25μl致敏红细胞悬液，震摇1-2分钟后置370C,30分钟后观察结果。 4. 每次试验均应设阴性、阳性对照。 血吸虫抗体IHA检测 结果判定： 1. “–”: 红细胞全部下沉在孔底，形成肉眼可见的紧密、边缘光滑的小圆点。 2. “+”: 多数红细胞下沉在孔底形成圆点，周围可见少量凝集的红细胞。 3. “++”:孔底中心可见少量红细胞下沉的小圆点，多数凝集的红细胞在孔底周围形成小薄层。 4. “+++”: 红细胞形成薄层凝集，布满整个孔底。 实验报告 一、血吸虫病动物模型的建立：材料、方法、过程及意义。 二、血吸虫病免疫诊断（ ELISA）的机理、方法、结果判断。