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血 糖 的 测 定(葡萄糖氧化酶法) 实验安排 一、第一次取血（未注射药） 二、皮下注射肾上腺素 三、实验内容的讲解 四、第二次取血（注射药物后30分钟） 五、血糖测定操作（比较注射肾上腺素前后血糖水平） 六、尿糖检测 实验目的要求 掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理和方法 了解血糖测定的临床意义 观察肾上腺素对家兔血糖浓度的影响 熟悉尿糖检测 尿糖的测定（班氏试剂法） 尿糖是指尿中的葡萄糖。正常情况下尿液中无糖，原尿由肾小球滤过，由肾小管重吸收。当血糖浓度持续升高，超过肾小管重吸收的能力（超过了肾糖阈），出现糖尿。 本实验是根据G的还原性设计的。G分子中含有半缩醛羟基，在热碱性溶液中可将硫酸铜(二价)Cu还原为氧化亚铜(一价Cu)，生成砖红色沉淀。其颜色随还原性物质的多少而不同。此法属于半定量检查，肉眼观察结果，初略判断相当于G的含量。详见讲义表格。 注意事项 先将班氏试剂煮沸后无颜色变化时再加入尿液。 加入尿液后立即记录时间 根据试管中尿液变化的时间和沉淀颜色对照表格作出判断。并用“+”表示程度。 遵义医学院生化教研室 * 一、血糖的定义及其参考值 血糖的定义：血糖是指血液中的葡萄糖。血糖浓度的参考正常值为3.89～6.11mmol/L。血糖浓度是反映体内糖代谢情况的重要生化指标。 二、血糖测定几种方法的介绍 1、G-氧化酶法：特异性高，用血量少，操作简便，测定值为“真值”。 2、Folin-吴宪法：稳定、准确，但操作繁琐。 3、己糖激酶法：特异性高，准确，试剂贵。 4、超微量还原法：血用量微量，造成误差大。 5、邻甲苯胺法：试剂须重蒸溜，有毒性。 三、血糖测定的临床意义 正常人清晨空腹血糖浓度为3.89-6.11mmol/L 高血糖： 空腹血糖浓度高于7.22～7.78 mmol/L 低血糖： 空腹血糖浓度低于3.33～3.89 mmol/L 肾糖阈：空腹血糖浓度高于8.89 ～10mmol/L （当血糖浓度超过肾糖阈时，肾小球滤过的葡萄糖在肾小管中不能全部被重吸收，则从尿中排除形成糖尿。） 四、血糖的来源及去路 来源： 1、食物中的糖→消化吸收 2、肝糖原→分解 3、非糖物质→糖异生 (生糖AA、乳酸、丙酮酸、甘油) 去路： 1、氧化分解供能 2、合成肝、饥糖原 3、转变为非糖物质 4、转变为其它糖→磷酸戊糖途径 五、血糖浓度的调节因素 血糖浓度实质上是全身各组织中糖代谢正常与否的反应，是临床常用检测指标之一。人和动物体内血糖的浓度维持在一定的生理水平，并处于动态平衡状态。这种平衡不是孤立进行的，而是受神经系统、各种激素和某些脏器调节作用来完成的。 （一）、肝脏的调节 肝脏是调节血糖浓度的重要器官 餐后：血糖浓度升高，肝糖原合成增加 空腹：肝糖原分解加强 饥饿：肝的糖异生作用增强 （二）、神经系统的调节 交感N(+)→肝糖原分解↑→肾上腺分泌↑→血糖↑ 迷走N（+）→肝糖原合成↑→胰岛素分泌↑→血糖↓ （三）、 激素的调节 1、升高血糖的激素： （1）、肾上腺素 （2）、胰高血糖素 （3）、糖皮质激素 （4）、生长素 其中肾上腺素是强有力的升高血糖的激素。肾上腺素的作用机制是通过肝、肌肉的细胞膜受体，CAMP、Pr激酶级联激活磷酸化酶，加速糖原分解（主要在应激状态下发挥调节作用）。 2、降低血糖的激素：胰岛素（体内唯一） 六、本实验原理 葡萄糖氧化酶（glucoe oxidase GOD）利用氧和水将血清中葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶（peroxidase POD）在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类的衍生物，即Trinder反应。 红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 与同样处理的标准葡糖液比色，可求出血中G的含量。 GOD 葡萄糖 + O2 + H2O → 葡萄糖酸 + H2O2 POD H2O2 + 苯酚 + 4-氨基安替比林 → 红色化合物 + H2O （色原性氧受体） (红色醌亚胺) 三、计算 1、注射肾上腺素前后的血糖浓度 血清葡萄糖（mmol/L）=---------------×5 测定管吸光度 标准管吸光度 2、注射肾上腺素