急性髓系白血病中骨髓微环境介导耐药探索摘要.pptxVIP

张翼鷟 教授 主任医师 ;急性髓系白血病中骨髓微环境介导耐药的探索;相关背景;相关报道;该文首先报道MSC对ALL细胞增殖和凋亡中的影响。(A)与MSC共培养 的ALL细胞系其凋亡率下降。(B)与MSC共培养的ALL原代细胞其凋亡率下降。 ;Western blot结果发现与MSC共培养后细胞周期相关蛋白的表达改变。;与MSC共培养后ALL细胞的wnt通路相关基因及蛋白表达改变。;加入wnt抑制剂后，可促进ALL细胞的凋亡;小动物活体成像实验发现加入wnt通路抑制剂及阿糖胞苷后， 小鼠体内瘤体明显缩小，生存期延长。说明wnt通路抑制剂 可拮抗MSC诱导的ALL细胞耐药; 白血病微环境中的多种细胞成分对白血病细胞有保护作用，其中包括基质细胞（间充质干细胞）。为阐明机制，该文作者将急性淋巴细胞白血病细胞与骨髓基质细胞共培养，研究后者对白血病细胞基因和蛋白水平的影响。结果表明Wnt信号参与MSC介导白血病细胞耐药。阻断Wnt通路可增强白血病细胞对化疗的敏感率，改善白血病小鼠模型的存活率。 Yang Yang, Saradhi Mallampati, Baohua Sun,et al. Wnt pathway contributes to the protection by bone marrow stromal cells of acute lymphoblastic leukemia cells and is a potential therapeutic target. Cancer Lett. 2013 June 1; 333(1): . doi:10.1016/j.canlet.2012.11.056. ;2009年Blood一篇文章报道骨髓基质细胞可保护CLL细胞逃避药物诱导的凋亡， 从而导致CLL细胞的耐药;小鼠MSC与CLL细胞共培养后，可降低氟达拉滨诱导的CLL细胞凋亡;同样，人MSC与CLL细胞共培养后，可降低氟达拉滨诱导的CLL细胞凋亡;MSC与CLL细胞共培养后，可降低地塞米松诱导的CLL细胞凋亡;当环磷酰胺与 氟达拉滨联用时 MSC对CLL细胞 的保护作用消失;Western blot结果显示CLL细胞与MSC共培养后， 促细胞凋亡相关蛋白如Mcl-1和PARP的剪切体表达下降;总结;2013年JCI一篇文章报道c-Myc/miR-548m/HDAC6通路 在非霍奇金B细胞淋巴瘤的细胞耐药中起重要作用;将B细胞淋巴瘤细胞系与MSC细胞系HK共培养后，通过基因芯片发现miR-548m, miR-548f和miR-548h的表达下调(A)。Taqman realtime PCR结果发现B细胞淋巴瘤细胞系Jeko-1, HBL-2, SUDHL-4与MSC细胞系HK共培养后，miR-548m的表达下调(B)。Western blot结果同样显示在这三种细胞系与HK共培养后，HDAC6的蛋白表达上调(C)。;套细胞淋巴瘤(MCL)，滤泡淋巴瘤(FCL)，弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的原代 淋巴瘤细胞与MSC细胞系HK共培养后，miR-548m的表达均下降;通过逆转录病毒载体感染Jeko-1使之高表达miR-548m（左上）， 通过realtime PCR（左下）和western（右）检测HDAC6的表达，结果发现HDAC6的表达下降。 ;荧光素酶报告载体实验证实miR-548m负向调控HDAC6;HBL-2与HK共培养后，生成的集落数明显多于单独培养组。;在单独培养组与共培养组加入 环孢素A和/或米托蒽醌，检测 淋巴瘤细胞的凋亡率。;体内成瘤实验结果显示， 将HK和HBL-2共同皮下注射组的 瘤体明显大于单独注射HBL-2组;HBL-2细胞高表达miR-548m后，瘤体较对照缩小。与HK共同 注射后，miR-548m+组的瘤体也小于miR-548m-组;miR-548m的表达与c-Myc呈负相关;上调miR-548m表达后，c-Myc的表达下降;总结;我们的工作;与MSC共培养后，KG1a，U937 (A)及 AML原代细胞(B)中c-Myc的表达升高。;10058F4是c-Myc的特异性抑制剂，在AML细胞培养中加入10058F4， AML细胞c-Myc的表达明显下降(B)，AML细胞的凋亡率明显升高(A)。;与MSC共培养体系中加入10058-F4，AML细胞的凋亡率高于未加10058F4组。;通过siRNA干扰使AML细胞系U937中c-Myc的表达下调(A)。 干扰后，AML细胞的凋亡增加，加入米托蒽醌后，干扰组的凋亡率高于未干??组(B)。;通过transwell实验证实，MSC对AML细胞起作用需要两者间紧密接触。如图A所示， AML细胞与MSC共培养后其凋亡率显著下降，而transwe