猪胃蛋白酶原 A 基因密码子优化和在毕赤酵母中表达的研究.docxVIP

猪胃蛋白酶原 A 基因密码子优化及在毕赤酵母中表达的研究 摘 要 天冬氨酸蛋白酶一般被称为酸性蛋白酶，在酸性条件下可催化水解蛋白质，是目前重要的工业用酶之一。胃蛋白酶属于天冬氨酸家族，是研究蛋白质结构与功能关系的重要模型。胃蛋白酶广泛存在于脊椎动物胃液中。胃蛋白酶经济价值高，用途广泛，胃蛋白酶在制革、方便食品、奶、口香糖加工制造等行业也有一定的用处。目前，商业、医药途径获得的胃蛋白酶主要从动物胃组织中提取，受动物脏器资源的限制，胃蛋白酶价格较高;容易残留一些动物自身的蛋白酶类，如一些组织蛋白酶等。而微生物反应器具有效率高效，操作简单，能够降低成本等优点，所以，通过筛选微生物反应器，然后规模化生产胃蛋白酶颇有发展前途.本文利用基因工程开展胃蛋白酶的表达研究，为解决这些问题提供了新的研究方向。 第一，根据Genebank上公布的猪胃蛋白酶原 A 基因序列，进行引物设计，通过RT-PCR克隆获得了湖北白猪胃蛋白酶原 A 基因。 第二，在猪胃蛋白酶原 A 克隆和序列分析的基础上，构建了毕赤酵母胞内表达载体 pPIC3.5K-pA。研究不同 pH、不同诱导时间、不同启始浓度和甲醇诱导浓度等因素对表达量的影响。 第三，根据毕赤酵母密码子的偏嗜性，利用定点突变，对稀有密码子进行了优化, 希望能够进一步提高重组酵母表达量。 关键词: 胃蛋白酶原 A；毕赤酵母；克隆；表达；优化 Abstr