分类薄层色谱法.PPT

* 第一节 分类和原理 第二节 薄层色谱 第三节 纸色谱法 第十九章 平面色谱法 Plane chromatography * 一、分类 薄层色谱法； 纸色谱法; 薄层电泳法； 第一节 分类和原理 * 纸层析和薄层层析也属于色谱分析法。但与其它色谱方法不同的是在分离过程中一般不使用动力源。纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。 * 将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，并将该端浸在作为流动相的溶剂（常称之为展开剂）中，随着溶剂向上的移动，经过试样点时，带动试样向上运动。原理与柱色谱相同。 * 二、参 数 Rf=L/Lo Rf值在0.2－0.8之间一般，在0.3－0.5之间最佳 (一）定性参数： 比移值 :溶质移动距离与流动相移动距离之比 原点 前沿 相对比移值 Rr= Rf(i)/ Rf(s)=Li/Ls * （二）相平衡参数——分配系数和容量因子 R’—— 流动相中停留的时间分数，单位时间内 一个分子在流动相中出现的几率。 R’也可表示组分分子在面上移动的速度。 (1- R’)/R’=Xs/Xm=CsVs/(CmVm)=KVs/Vm=k R’=1/(1+k) Rf ＝L/L0=ut/u0t= R’=1/(1+k) * （三）面效参数： 理论塔板数 n=16(L/W)2 塔板高度 H=L0/n （四）分离参数： 分离度：R=(L2-L1)/[(W1+W2)/2]=2d/(W1+W2)＞1 分离数SN: (R＝1.177时） Rf=0到Rf=1容纳斑点数 SN=L0/(b0+b1) -1 b0和b1是通过测定其它组分的Rf值和半峰宽，二者在一定点样量范围内成直线关系，用回归方程求得。 Rf=0时组分的半峰宽 Rf=1时组分的半峰宽 * 一、类型：吸附色谱、分配色谱 1、吸附色谱：固定相为吸附剂。A、B两组分在 薄层板上经过－－－ 第二节 薄层色谱 解 吸 再吸附 再解吸 吸附 由于两组分在固定相的吸附能力不同，展开剂对两组的溶解能力的不同，即吸附系数不同，移动速度不同。极性大的组分迁移速度慢，Rf小。 * 2、分配色谱： 利用试样中各组分在固定相与流动相之间的分配系数的不同，各组分在板上的迁移速度不同而获得分离的薄层色谱法。 正相色谱：流动相的极性比固定相的极性小。 例： Si-OH表面吸附17％水为固定相， 极性较强，流动相用弱极性溶剂正相分配色谱。 极性大的组分Rf小。 反相色谱：流动相的极性比固定相的极性大。 极性大的组分Rf大。 * 二、吸附剂，展开剂 （一） 吸附剂(层析板): 吸附色谱固定相， 用专门的涂布器把浆状的吸附剂（硅胶或氧化铝，10～40μm）均匀地涂在长条形玻璃板上（厚度0.15～0.5mm），干燥活化后即可使用。 1 硅胶： 表面带有 硅醇基 ≡Si—O—H 极性基团 各组分的极性基团与硅醇基形成氢键的能力不同而被分离 氢键 吸附中心 * 活化去水，增加吸附位点。 2、氧化铝： 氧化铝 酸性 中性 碱性 pH4.0 pH7.5 pH9.0 * 吸附剂的活度与含水量的关系 活性级 硅胶含水量％ 氧化铝含水量％ Ⅰ 0 0 Ⅱ 5 3 Ⅲ 15 6 Ⅳ 25 10 Ⅴ 38 15 活化去水，增加吸附位点。 * （二）展开剂(溶剂)： 由一种或多种溶剂按一定比例组成。 * 非极性 极性 极性 非极性 不活泼 活泼 A B C A B C * 1 制备：涂板，活化，样品处理 三、 操作方法： 2 点样：用微量注射器或玻 璃毛细管吸 取一定量试样点在原点上。试样点的直径一般应小于5mm。可并排点多个试样同时展开。 (2－4mm，0.01－0.1%, nmL) * 3 展开：随时间t延长，展开速度变慢边缘效应,先饱和. 4 显色、检测:有些组份在紫外光照射下产生荧光，可在紫外灯下用铅笔将组份斑点描绘出来。常用的显色方法有喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。 * 四 定性，定量 1 定性：Rf 2 定量： 洗脱法:洗脱，收集，用其他方法检测 直接定量法：荧光,可见,紫外透过率 * 五、 高效薄层色谱法 吸附剂颗粒小，n大，R高 六 薄层扫描