2012实验三通课幻灯片.pptVIP

实验报告一 粪便标本的鉴定结果和鉴定依据 1，平板上菌落特点 2，革兰染色结果 3，双糖铁培养基生长现象（生化反应实验） 4，血清学实验 四、实验方法： 1、细菌涂片标本的制备 涂片 干燥 固定 2、染 色 1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5min，待标本冷却后用水冲洗。 2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30s~1min；用水冲洗。 3）复染：用碱性美兰溶液复染1min；用水冲洗后用吸水纸吸干。 3、油镜观察 未染色 初染后 脱色后 复染后 初染 脱色 复染 镜检 五、实验结果： 结核分枝杆菌染成红色，菌体细长，有时微弯，常堆积成团，排列无序，偶可见呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。 六、注意事项： 1.初染加热的温度，勿沸腾 2.及时补加染液，以免染液干涸 3.待标本冷却后再冲洗 4.脱色时，脱色剂脱色时间宁长勿短 实验报告二 抗酸染色 简述抗酸染色原理、方法和结果。 结果绘制抗酸染色油镜下观察图。 下周实验内容 1.病毒的接种（小鼠和鸡胚） 2.真菌菌落的形态观察 3.考试 肠道致病菌的鉴定药敏试验抗酸染色 　 内 容 提 要 一 肠道杆菌的鉴定（2学时） 革兰染色（1片/2人），双糖铁培养 基接种（8支/室），玻片凝集试验（1片/2人） 二 药敏试验（0.5学时） 介绍及展示示教平板 三 抗酸染色（2.5学时） 示教，1片/人 病原菌的检验程序 增菌培养 革兰染色 分离培养 接种琼脂斜面纯培养 采集标本 生化试验 血清学试验 动物试验 分析鉴定 革兰染色 观察菌落特征 一、致病性肠道杆菌的鉴定 粪便 生化反应 SS琼脂平板 （双糖含铁培养基） （必要时进行增菌培养） 得出结论 革兰染色 菌落观察挑取可疑菌落 纯培养 血清学鉴定 SS培养基 含有胆酸盐抑制G+,枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌,致病的沙门菌和志贺菌能大量生长. 含有中性红指示剂和乳糖,中性红遇酸变粉红. 常用于培养肠道致病菌. SS培养基上各菌的生长特点 大肠杆菌：粉红色大菌落 伤寒杆菌：无色细小半透明菌落 福氏痢疾杆菌：无色细小半透明菌落 双糖铁培养基的特点 含有乳糖和葡萄糖：产酸产气 含有硫酸亚铁：如细菌分解含硫氨基酸生成 硫化氢，可形成黑色沉淀 酚红指示剂： 酸：黄 碱：红 用于观察细菌是否产生硫化氢及对糖的发酵能力 1)大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气（糖发酵试验）,是斜面及底层均呈黄色并有气泡。 2) 沙门菌和志贺菌只发酵葡萄糖,不发酵乳糖,分解葡萄 糖产的酸使培养基pH下降,酚红指示剂变黄,但是培养基中的葡萄糖仅有0.1%,在斜面的酸性物质被氧化成挥发性酸,且细菌氧化氨基酸物质产生的氨的中和作用,使斜面变红,而底层则为黄色。 另沙门菌分解含硫氨基酸，有黑色沉淀。 双糖铁培养基上各菌的生长特点 双糖铁培养基上各菌的生长现象 双糖铁培养基接种方法 将可疑菌落接种于双糖铁培养基上（穿刺+斜面 ），37度培养24小时，第二天观察结果。 原理: 颗粒性抗原(未知细菌)+已知抗体(诊断血清) 材料：伤寒血清、待检菌 方法:玻片分为左右两区，每区各加伤寒诊断血清 1滴, 挑取可疑菌落（黑色或无色菌落、粉红色大菌落）培养物少许，于血清中研磨成均匀乳状，轻轻摇动玻片，经1-2min后观察结果。 结果:凝集+ ，待测菌 为伤寒杆菌 不凝集-，待测菌 不是伤寒杆菌 血清学实验：玻片凝集反应 本次实验所做内容 ⑴观察菌落特征（SS平板） ⑵取可疑菌落做革兰染色 2片/台 ⑶将可疑菌落接种于双糖铁培养基上（穿刺+斜面 ），37度培养24小时，观察结果. 1支/台 ⑷伤寒杆菌玻片凝集试验 2片/台 (5)得出结论 目的要求 1.掌握纸片扩散法药敏试验的原理及结果判定 2.了解药敏试验的操作方法和意义 二 药敏试验（0.5学时） 原理 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼