青岛市基础的研究计划项目申请书2013.doc

青岛市基础研究计划项目 申 请 书 项目名称 近岸海域环境雌激素实时监测关键技术研发 申请者 田华 承担单位 中国海洋大学 参加单位 邮政编码 266003 通讯地址 青岛市市南区鱼山路5号中国海洋大学海洋生命学院 单位电话手 机传 真电子信箱 tianhua@ouc.edu.cn 主管部门 教育部 申请日期 2012-09-09 青岛市科学技术局 二〇一二年制 一、主要信息表 研 究 项 目 名 称 近岸海域环境雌激素实时监测关键技术研发 所属领域 (四)海洋 摘 要 环境中大量具有环境雌激素效应的农药、兽药、饲料添加剂等通过各种途径富集在近海及海岸带，对动物及人类的生长、发育、生殖存在潜在危害。传统的化学监测方法无法考虑不同种类雌激素类化合物对生物体的综合效应，并具有处理步骤复杂、仪器价格昂贵、维护费用高等缺点。本项目拟开发由卵黄原蛋白(vtg)调控报告基因绿色荧光蛋白(gfp)和红色荧光蛋白(rfp)的基因重组海洋线虫Chromadorina germnica环境雌激素监测体系，从而建立活体、原位、实时、快速的环境雌激素新型生物监测方法。 申请金额 10万元 起止时间 2013年1月至2014年12月 项 目 申 请 人 姓 名 田华 性 别 女 年 龄 29 学 历 研究生 职 称 讲师 签 名 手 机电子信箱 tianhua@ouc.edu.cn 单位名称 中国海洋大学 通讯地址 青岛市市南区鱼山路5号中国海洋大学海洋生命学院 邮政编码 266003 电 话 0532主管部门 教育部 单位性质 事业单位 主要参加人员 姓 名 年 龄 学 历 职 称 现工作单位 签名 汝少国 45 研究生 教授 中国海洋大学 王 蔚 41 研究生 副教授 中国海洋大学 王真钰 27 研究生 博士生 中国海洋大学 张晓娜 25 研究生 博士生 中国海洋大学 二、立项依据 （立项背景、研究意义、项目目标，1500字以内）。 环境雌激素是指能够干扰生物体内激素代谢平衡，从而影响生物体生长、发育、繁殖等生理功能的外源性化学物质。环境中的大量具有环境雌激素效应的农药、兽药、饲料添加剂，如有机磷农药、拟除虫菊酯类农药、玉米赤霉醇、己烯雌酚等通过各种途径富集在近海及海岸带()。 环境雌激素传统分析主要采用气相色谱、高效液相色谱与傅立叶红外或质谱联用等化学监测方法。然而，由于环境雌激素种类繁多，结构复杂，很难通过化学性质判断某化学物是否具有环境雌激素活性，而且也无法考虑不同种类雌激素类化合物对生物体的综合效应。此外，由于样品要经过萃取、浓缩等复杂的前处理步骤，样品回收率和精密度有时不理想，且仪器价格昂贵、维护费用高、分析程序复杂，化学监测难以进入基层的监测实验室，更无法进行高通量的在线监测()。与之相比，生物监测可考虑到环境雌激素间的交互作用、在生物体内的积累和总体综合效应，能直接反映出环境质量对生态系统的影响；具有连续监测的功能；监测灵敏度高；价格低廉，不需购置昂贵的精密仪器；不需要繁琐的仪器保养及维修等工作；可以在大面积或较长距离内密集布点，是一种较为方便、经济、可靠、灵敏的方法()。 而目前比较常用的生物监测方法仅局限于基因重组酵母细胞评价这一离体检测技术，基因重组酵母细胞评价是将人雌激素受体(hER)基因、雌激素效应元件(ERE)及编码D-半乳糖苷酶的Lac Z报告基因重组于酵母细胞，使β-半乳糖苷酶的表达量在雌激素的调控之下()。β-半乳糖苷酶可催化底物ONPG(邻-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖)显黄色，即可通过颜色的深浅甄别或监测环境雌激素()。尚未发现利用生物体活体检测来阐明水体环境雌激素污染状况的先例。离体试验适用于化合物的初步筛选，具有快速、方便等优点。然而，由于其未考虑到化合物发挥环境雌激素效应的多种机制、不同途径，有可能导致假阴性，即对生物体活体具有环境雌激素效应的化合物在体外筛选中被误认为没有雌激素活性()。目前迫切需要开发方便快捷的环境雌激素生物活体监测方法。此外，基因重组酵母细胞评价需要破坏酵母细胞壁，不同的破壁方法对实验结果的影响很大；其次是用Lac Z作为报告基因评价环境雌激素，虽然比较敏感，但酶活性受时间、温度、pH、菌液浓度的影响很大，因而不同时间或地点实验结果误差较大，很难进行比较()。 针对以上问题，我们提出由卵黄原蛋白(vtg)调控报告基因绿色荧光蛋白(gfp)和红色荧光蛋白(rfp)的基因重组海洋线虫Chromadorina germnica环境雌激素生物活体监测体系。海洋线虫C. germanica具有个体小、生活史短(14d)、繁殖力强、易于培养、通体透明、易于观察、便于基