植物中瞬时表达外源基因的新型侵染技术Anewagroinoculation.PDF

HEREDITAS (Beijing) ISSN 0253-9772 植物中瞬时表达外源基因的新型侵染技术 杨丽萍, 金太成, 徐洪伟, 李华，周晓馥 吉林师范大学生命科学学院，四平 136000 摘要:由于瞬时表达系统的局限性使其不利于规模化生产的应用，本文介绍了一种新型的瞬时表达侵染技术 —种子吸收法在植物中进行外源蛋白的表达。利用种子自然吸收来源于TMV 病毒载体的农杆菌重悬液在 番茄中成功的表达了报告基因GFP，并优化了影响基因表达的各种因素，包括菌液重悬液浓度和其他侵染 条件。与其它侵染方法相比，该方法具有独特优势，如操作过程简便，有利于外源蛋白的规模化生产，并 能够进一步扩大植物生物反应器的宿主范围。我们推测种子吸收法将有利于重组药用蛋白在植物中的工业 规模化生产。 关键词：植物生物反应器；瞬时表达系统；种子吸收法；GFP A new agroinoculation technology for foreign gene expression in plants by means of transient expression YANG Li-Ping , JIN Tai-Cheng, XU Hong-Wei, LI Hua, ZHOU Xiao-Fu The School of Life Science, Jilin Normal University, Siping 136000, China Abstract: Due to the laborious and scale-up limitation we have developed a simple method named “seed absorption” to express foreign proteins in plants by means of transient expression. It has been shown that the reporter gene GFP was expressed successfully in tomato (Solanum lycopersicum L.) plants by seed absorbing Agrobacterium suspension containing TMV-based p35S-30B-GFP vector. Various factors influencing the gene expression were optimized including Agrobacterium cell density and other inoculation conditions. This method 收稿日期：2012-09-13；修回日期：2012-10-19 基金项目: 国家自然科学基金项目 （编号资助 作者简介: 杨丽萍, 博士研究生,专业方向: 遗传学。E-mail ：yangliping781124@ 通讯作者: 周晓馥,博士, 教授, 研究方向: 植物生物反应器。E-mail ：zhouxiaofu@ has the special advantages as simple work process, ease to scale-up, and further expanding the host range of plant bioreactor than previous methods. We assume that the seed absorption method will facilitate the industrial scale production of the recombinant pharmaceutical proteins in plants . Keywords ：plant bioreactor; agroinoculation; seed absoption method; GFP 生物反应器(Bioreactor)是指利用生物系统大规模生产有重要商业价值的外源蛋白质, 用 [1] [2] 于医疗保健和科学研究 。植物是最经济的天然生物反应器 。近20年以来，已有大量蛋白 包括人血清蛋白、生长因子、抗体、疫苗、工业酶、生物制品和生物分子试剂在植物中成功 [3