口蹄疫病毒L2B基因siRNA重组腺病毒质粒构建.docVIP

口蹄疫病毒L2B基因siRNA重组腺病毒质粒构建 　　摘要：根据siRNA设计原则，分别选择O型FMDV的L和2B基因上保守序列作为可能的干扰位点，设计了2个siRNAs，并将siRNAs克隆到pSIREN-Shuttle中，获得2个siRNA重组表达载体pShuttle-L和pShuttle-2B。用限制性内切酶I-Ceu I和PI-Sce I双酶切siRNA重组表达载体和腺病毒质粒载体pAdeno-X，利用体外连接法获得了重组质粒。经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定，成功构建了重组腺病毒质粒pAdeno-L和pAdeno-2B。 　　关键词：口蹄疫病毒；RNA干扰；重组腺病毒质粒 　　中图分类号：S852.65+9.6 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）16-3152-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.16.039 　　Construction of Recombinant Adenovirus Plasmid Containing the L and 2B Gene siRNAs of Foot-and-Mouth Disease Virus 　　JIA Jun-tao1，GUO Feng-ying1，Wulunjiruga1，ZHANG Xiao-yu1，CHEN Jin-ding2 　　（1.Vocational and Technical College of Inner Mongolia Agricuitural University， Baotou 014109， Inner Mongolia， China； 　　2.South China Agricultural University，Guangzhou 510640，China） 　　Abstract： In this study， the conservative sequence in L and 2B gene of O type FMDV were chose as possible interference sites. Two siRNAs were designed and synthesized. These siRNAs were cloned into the plasmid pSIREN-Shuttle， then the siRNAs recombined expression vectors were obtained including pShuttle-L and pShuttle-2B. The vectors and the adenovirus vector pAdeno-X were digested with restriction endonuclease I-Ceu I and PI-Sce I and connected in vitro， then recombinant plasmids were obtained. The result of PCR， enzyme-cutting and sequencing suggested that the recombined adenovirus plasmids pAdeno-L and pAdeno-2B were constructed successfully. 　　Key words： Foot-and-mouth disease virus（FMDV）； RNA interference（RNAi）； recombinant adenovirus plasmid 　　口蹄疫（Foot-and-mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的偶蹄类动物的一种急性、热性、高度接触性传染病[1]。它不仅可使动物生产性能下降，而且还限制动物及动物产品的国际贸易，有“政治经济病”之称，被OIE列为烈性传染病之首[2]。由于FMDV感染率高、传染性强、患病动物排毒量大，可使爆发地区遭受巨大经济损失，因此该病是世界各国检疫和防疫的重点对象。目前，采用免疫接种与扑杀相结合，再辅以封杀、隔离、消毒、抗体检测等综合措施，但仍不能控制FMDV的感染与传播，这就迫使人们寻求更加有效的防控方法。RNA干扰（RNA interference，RNAi）是一项可以在体外有效抑制病毒复制的技术，其是由与靶基因序列同源的dsRNA引发广泛存在于动植物中的序列特异性基因转录后的沉默过程[3]。腺病毒载体因具有感染细胞种类多、感染效率高、外源基因表达水平高，且既适于体外又适于体内研究等特点而被作为转基因载体[4]。本研究构建了携带有O型FMDV L、2B基因siRNA片