pcr技术发展概述幻灯片.pptVIP

对非编码区的一个主要研究方向是对调控元件的研究。因为在非编码区，只有一小部分已被证实为有用成分，能帮助基因开启和关闭以调控基因的表达，即调控DNA,也称为启动子。 序列捕获芯片技术 用微乳滴PCR(emulsion PCR, emPCR)来生成扩增产物. 将固化引物的微球与单链DNA文库模板以及必要的PCR反应化合物一起混合, 微球与文库片段的比例适当, 以确保大多数微球结合的单链DNA分子不超过一个. 水溶液与油混合形成油包水结构乳滴. 每个乳滴都是一个进行后续PCR反应的微型化学反应器. 经过多轮热循环, 每个微球表面都结合了数千个相同的DNA拷贝. 然后打破微乳滴后, 扩增微球被收集、富集并固定在一个平的玻璃基板上形成一个无规则的阵列. 转移并放置到刻有规则微孔阵列的微孔板上. 每个微孔只能容纳一个微球. 微孔板被安装成为流通池的一部分. 其中一面可以通过测序反应的化合物, 另一面则与CCD光学检测系统的光纤部件相接触. 测序技术 1,杂交测序 第一代的sanger法,测量耗时耗力,片段短. 2,合成测序 Solexa,Roche 454(焦磷酸法) 3,单分子测序 生物纳米孔,非光学显微镜直接碱基成像 Solexa测序 基于PCR原理的扩增技术有了很大的发展. 针对不同的实验标本对象及需求,要选择适合的技术方法.高效,高质量,低成本,这三者间要找到合适的平衡点. 总结 临床实验室中,PCR技术及其应用 江苏大学 周滔 提纲 病毒性心肌炎的临床实例分析 柯萨奇病毒的实验室检测方法 引申,PCR技术,以及DNA测序 六月,18区30床女病人 主诉:上感(鼻塞,轻微咳嗽,无痰,无咽痛),乏力(需扶墙走, 不能拿东西),头晕.体温38.5°C 体征:胸痛(瞬间痛)无胸闷,发痛前有牙龈肿痛两周,未见脓,未闻及心包摩擦音,奔马律.BP:92/62mmHg,P:92/min. 六月30日入院时:2,3,aVF导联抬高0.2mV. CK 503U/L,CK-MB 56U/L.(当时未查Tro) 7月2日:K 3.1(3.5-5.5)mmol/L,Tro 5.27 (0-0.1)mmol/L,CK-MB 79.44(0.00-16.00)mmol/L,CK 1123.0(20-200)U/L,hs-CRP 11.53(0.0-3.00)mg/L. ECG:Ⅱ,Ⅲ,aVF导联提示下壁ST段抬高;V4,5,6提示心尖导联抬高. 好转以后T波倒置,异常Q波,有演变表现 心超:收缩功能下降,室壁活动下降,无间断性,普遍的活动降低. 病毒性心肌炎? 急性心肌梗死? 初步诊断 甲强龙腎上腺皮质激素,下调免疫反应.(渐停) 罗氏芬,抗感染. 多巴胺,强心升血压 VitC ,VitB6,二磷酸果糖,营养心肌 Kcl,Mgcl2 采取措施 实验室后继推荐检查 病毒抗体效价滴定:Ab效价640?(320为可疑) ELISA 查柯萨奇病毒IgM,IgG. PCR作为临床科研常用的基因诊断方法,其扩增片段的特异性主要由引物决定,所以设计引物成为PCR成功的关键. 在此,以柯萨奇病毒B3(CVB3)为例 柯萨奇病毒B组3型 GenBank:AY752944.2 球形,衣壳20面体,核心为单正RNA病毒,有衣壳蛋白(VP) 编码VP1 tgtcaggctattgaaggacactcctttcatttcgcaggaaaactttttccagggcccagtggaagacgcgataacagccgctatagggagagttgcggat 2500 acagtccgataacttcctgtgaggaaagtaaagcgtccttttgaaaaaggtcccgggtcaccttctgcgctattgtcggcgatatccctctcaacgccta 2410 2420 2430 2440 2450 2460 2470 2480 2490 accgtgggtacagggccaaccaactcagaagctataccagcactcactgctgctgagacaggtcacacgtcacaagtagtgccgggtgacaccatgcaga 2600 tggcacccatgtcccggttggttgagtcttcgatatggtcgtgagtgacgacgactctgtccagtgtgcagtgttcatcacggcccactgtggtacgtct