噻唑烷二酮类药物对脂肪细胞增殖与分化影响及其临床应用.docVIP

噻唑烷二酮类药物对脂肪细胞增殖与分化影响及其临床应用 　　摘要：目的研究噻唑烷二酮类代表药物曲格列酮对人大网膜前脂肪细胞增殖和分化的影响及其临床应用意义。方法体外培养人大网膜前脂肪细胞，曲格列酮作用后，四唑盐(MTT)比色法观察细胞增殖；油红染色抽提法观察细胞分化。结果浓度为1μmol／L，10μmol／L曲格列酮能够明显促进前脂肪细胞的增殖，同时也促进前脂肪细胞向脂肪细胞分化。结论噻唑烷二酮类药物促进前脂肪细胞成熟，发挥脂肪组织完善的储脂和内分泌功能，改善胰岛素抵抗状态。在临床上，对于以胰岛素抵抗为基础的糖尿病和动脉粥样硬化等疾病应作为基础用药。 　　关键词：噻唑烷二酮类；脂肪细胞；增殖；分化 　　中图分类号：R329.2　文献标识码：A　文章编号：1672－1349(2007)08－0705－02 　　肥胖尤其以内脏脂肪增多为主的中心性肥胖，是胰岛素抵抗及其相关的2型糖尿病、动脉粥样硬化和代谢综合征等疾病的危险因素。肥胖在细胞水平主要由表现为脂肪细胞数目异常增多和体积异常增大，因此，研究内脏脂肪细胞的增殖分化以及在细胞水平进行干预是靶向治疗肥胖的关键环节。 　　新一代噻唑烷2.4二酮类(TZDS为一类胰岛素增敏剂，通过改善胰岛素抵抗而降低血糖和改善代谢综合征其他的表现，但对于其具体作用机制尚存较大争议，是目前内分泌领域研究的热点和难点。现在原代培养人大网膜前脂肪细胞的基础上，观察曲格列酮对细胞增殖和分化的影响，试图从人体内脏脂肪组织功能角度探讨药物作用机制，为相关疾病治疗提供依据。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1．1 材料D-MEM／F－12(1:1)培养基购自CibcoBRL公司；人转铁蛋白、牛血清白蛋白、胰岛素、地塞米松、三碘甲状腺原氨酸(T3)、生物素、泛酸钙、3－异丁基－1－甲基黄嘌呤(IBMX)、四氮甲基噻唑兰(MTT)、油红O均购自Sigma公司；曲格列酮(trosiglitazone)纯品由北京协和医院卫生部内分泌重点实验室提供。 　　 　　1．2 方法 　　1．2．1 原代分离培养人大网膜前脂肪细胞和分化培养基配制 　　采用本实验室摸索建立的胶原酶消化人大网膜脂肪组织原代分离培养前脂肪细胞的方法和分化培养基配制：D－MEM／F－12基础培养基中添加胰岛素0.5μmol／L、地塞米松0.2μmol／L、B 0.2mmol／L、生物素33μmol／L、泛酸钙17μmol／L、转铁蛋白10mg／L和IBMX0.5mmol／L。 　　1．2．2 曲格列酮对前脂肪细胞增殖的影响原代培养的人前脂肪细胞以104／mL接种于96孔培养板，设对照组(含10％胎牛血清的D－MEM／F－12配制的完全培养液)和3组干预组(含0.1mmol／L，1μmol／L和10／μmol／L曲格列酮的完全培养液)干预细胞48h;同时选取10μmol／L曲格列酮组分别干预细胞24h，48h，72h。经MTT比色法和酶联免疫检测仪(波长490nm)测定吸光度值用以代表活细胞数及细胞增殖情况。实验重复3次，每组设8孔重复(N=3，n=8)。 　　1．2．3 曲格列酮对人前脂肪细胞分化影响 细胞以105／mL接种于24孔板，设分化培养液的对照组和3组干预组(分别为含0.1 Jamol／L，1μmol／L和10.μmol／L小檗碱的分化培养液)。分组分化诱导3d后改不含IBMX的分化培养基分组诱导至第18天，油红染色抽提法测定吸光度值(波长490 nm)。实验重复3次(η=3)，每组设6孔重复(η=6)。 　　 　　1．3 统计学处理采用SAS8.2软件进行析因设计的方差分析；组间比较采用￡检验。数据用均数±标准差表示(x±s)，P0.05为有统计学意义。 　　 　　2　结果 　　 　　2．1 曲格列酮对人原代前脂肪细胞增殖的影响 　　2．1．1 不同浓度曲格列酮对前脂肪细胞增殖的影响干预细胞48h，MTT结果显示：曲格列酮0.1mmol／L时OD值O.192+0.019，l／mol／L，10μmol／L时分别为0.215±0.022，0.236±0.031与对照组0.187±0.015相比，1μmol／L和10μmol／L曲格列酮能明显促进前脂肪细胞的增殖(P0.05)，有剂量依赖趋势。 　　2．1．2 曲格列酮不同作用时间对前脂肪细胞增殖的影响 10μmol／L的曲格列酮分别刺激人前脂肪细胞24h，48h，72h，观察到在48h和72h能够显着促进前脂肪细胞的增殖(P0.05)。详见表1。 　　 　　 　　2．2 曲格列酮对人前脂肪细胞分化的影响添加分化培养基孵育的对照2组细胞较基础培养基孵育的对照1组细胞明显成熟且含有较高的脂质量(P0.01)。浓度为1μmol／L，10μmol／