通过透明颤菌血红蛋白基因表达提高γ聚谷氨酸的生物合成.PDFVIP

第 １４卷第２期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１４ Ｎｏ２ ２０１６年３月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｍａｒ２０１６ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１６０２００１ 通过透明颤菌血红蛋白基因表达提高 γ 聚谷氨酸的生物合成 汤　 宝，冯小海，张　 丹，许宗奇，姜永翔，李　 莎，徐　 虹 （南京工业大学 食品与轻工学院，江苏 南京 ２１１８００） 摘　 要：γ 聚谷氨酸（γ ＰＧＡ）的微生物合成是高消耗氧的生物过程，采取基因工程手段改造γ ＰＧＡ 生产菌株 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＮＸ ２，以提高细胞利用氧的能力。 利用重叠ＰＣＲ 方法将 Ｐ４３ 强启动子与透明颤菌血红蛋白 （ＶＨｂ）基因ｖｇｂ拼接，插入大肠杆菌 枯草芽胞杆菌穿梭质粒ｐＭＡ５上，得到重组质粒ｐＭＡ５ Ｐ４３ ｖｇｂ，并将其转 ＋ 化至Ｂ． ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＮＸ ２ 中，从而获得重组菌Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＮＸ ２（ｖｇｂ ）。 经ＳＤＳ ＰＡＧＥ分析和ＣＯ差光谱法证明ＶＨｂ ４ × 能在γ ＰＧＡ生产菌株中成功表达，且具有生理活性，大小约为１６ １０ 。 在７５ Ｌ发酵罐上对重组菌Ｂ． ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＋ ＮＸ ２（ｖｇｂ ）进行发酵性能考察，结果显示：重组菌比出发菌的生物量提高了４１２％，γ ＰＧＡ 的产量提高了 ７５％，传代多次表明重组菌具有良好的发酵稳定性。 该研究为γ ＰＧＡ 的进一步工业化生产奠定了基础。 关键词：Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ；透明颤菌血红蛋白；γ 聚谷氨酸 － － － 中图分类号：ＴＢ３２４　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１６）０２ ０００１ ０６ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｇｅｎｅ ｔｏ ｅｎｈａｎｃｅ ｐｏｌｙ⁃γ⁃ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＮＸ⁃２ ＴＡＮＧ Ｂａｏ，ＦＥＮＧ Ｘｉａｏｈａｉ，ＺＨＡＮＧ Ｄａｎ，ＸＵ Ｚｏｎｇｑｉ，ＪＩＡＮＧ Ｙｏｎｇｘｉａｎｇ，ＬＩ Ｓｈａ，ＸＵ Ｈｏｎｇ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１１８００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｐｏｌｙ⁃γ⁃ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ ｉｓ ａｎ ａｅｒｏｂｉｃ ｐｒｏｃｅｓｓ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ ｗｅ ｔｒｉｅｄ ｔｏ ｔｒａｎｓｆｏｒｍ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ｂｙ ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｉｔｓａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｕｓｉｎｇ ｏｘｙｇｅｎ． Ｆｉｒｓｔ，ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄｐＭＡ５⁃ Ｐ４３⁃ｖｇｂ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎ