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噬菌体展示随机肽库技术医学研究应用 　　摘要：噬菌体展示随机肽库是将编码外源性多肽的DNA序列插入噬菌体外壳蛋白基因，产生由数十亿种随机肽段与噬菌体外壳蛋白以融合形式呈现在噬菌体表面的重组噬菌体库。近年来，噬菌体展示随机肽库已成为筛选蛋白和多肽的重要生物技术，并被广泛应用于医学研究。笔者就其在肿瘤和自身免疫性疾病研究以及疫苗研制中的应用现状进行综述。 　　关键词：噬菌体展示随机肽库；多肽筛选；抗原表位 　　中图分类号：R37；R392.33 文献标志码：A 文章编号：1008-2409（2016）03-0171-05 　　噬菌体展示随机肽库（phage display random pepfide library，PDPL）技术诞生于20世纪80年代。1985年，Smith将源自限制性内切酶EcoRI的基因片段插入丝状噬菌体的基因Ⅲ中，得到了在外壳蛋白中融合表达该基因片段编码多肽的重组噬菌体颗粒。这些融合表达的EcoRI肽段可被EcoRI抗体所捕获，表明展示在噬菌体外壳表面的外源性蛋白与天然蛋白有着相同或相近的空间结构和生物活性。1990年，Scott等成功将PDPL技术应用于抗原表位的筛选。目前，噬菌体展示随机肽库已是包含数十亿个随机肽段序列的大容量肽库，对蛋白靶分子而言是一种丰富的资源库。30多年来，PDPL已发展成为筛选蛋白和多肽的重要生物技术，并被广泛应用于医学研究。 　　1 PDPL技术特点与抗原表位筛选 　　PDPL是将编码外源性多肽的DNA序列插入噬菌体外壳蛋白基因，产生由数十亿种随机肽段与噬菌体外壳蛋白以融合形式呈现在噬菌体表面的众多重组噬菌体。PDPL作为一项新的技术平台，其特点，一是首次有能力通过基因信息与蛋白质功能无缝连接的方式同时研究众多的蛋白质变异体，并已被广泛而有成效地用于探索受体与配体相互作用结合位点、寻找高亲和力配体分子等蛋白质与蛋白质相互作用的研究；二是不仅能筛选天然蛋白质上的线性抗原表位，而且还能筛选天然蛋白质不存在的模拟表位。 　　通过对未知抗原表位寻找，PDPL技术可广泛应用于新型诊断试剂和疫苗研制等研究领域。目前，应用PDPL技术已经筛选出丰富的重要抗原表位。高源等报道，应用抗hIL-15抗体从PDPL中筛选出能与IL-15竞争性地结合抗IL-15单抗的4组表位序列：MTPFWQK、MSPFNQK、MIPYWQK和MIPFHQK。经过小鼠免疫实验结果显示4组多肽均能诱导IL-15特异性免疫反应。李晓菊等应用PDPL筛选出抗人B7-H4中和抗体特异性结合的模拟抗原表位肽，经动物免疫实验发现，合成的模拟抗原表位肽能诱导高滴度的抗hB7-H4抗血清，后者具有补体依赖的细胞杀伤活性。其他如葡萄球菌肠毒素B特异性结合表位肽、人类免疫缺陷病毒（HIV）模拟表位以及与甲型肝炎病毒中和活性表位VPl157-171区相似的模拟表位等诸多抗原表位近年来也先后从PDPL中获得。 　　2在肿瘤研究中的应用 　　近年来，由于PDPL技术的出现，越来越多的肿瘤分子标志物被筛选和鉴定。Vandevyver等报道，用乳腺癌细胞MCF-7单抗5D10从PDPL筛选特异性抗原表位，得到的MCF-7抗原模拟表位短肽能特异性地与5D10结合，并能竞争性抑制MCF-7与5D10的结合。Zhang等利用早期原发性肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）患者血清从噬菌体展示随机十二肽库筛选得到HCC模拟表位肽HCl（RGWCRPLPKGEG）。实验表明此模拟表位肽对早期HCC具有较高的诊断价值，是一种重要的HCC血清生物标志物。Shen等则利用前列腺特异性膜抗原（prostate specific membrane antigen，PSMA）蛋白从噬菌体展示随机十五肽库中筛选出2种对PSMA具有高亲和力的十五肽SHSFSVGSGDHSPFT和GRFLTGGTGRLLRIS。细胞荧光显微镜观察这两种十五肽能靶向结合人前列腺癌的特异性膜抗原，显示出其在前列腺肿瘤的显像与治疗中具有的优越性。其他如肺癌特异性抗原表位肽LQPHDRNMHLPT，卵巢癌特异性抗原表位肽THRVHLH以及膀胱癌特异性抗原表位肽NYZL1也在新近从PDPL中筛出。因此，PDPL技术在肿瘤研究中的检测和诊断、药物研制、基因治疗及疫苗研发等方面均具有重要意义。 　　3在自身免疫性疾病研究中的应用 　　临床上自身免疫性疾病（autoimmune diseases，AID）主要有系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、免疫性不孕不育症、强直性脊柱炎和干燥综合征等。AID临床诊断手段有限，主要依赖自身相关抗体的检出。然而，不同于感染性疾病容易得到用于诊断特异性抗体和抗原，AID的标志性抗体为数尚少并缺乏特异性，而且天然抗原未知或