IAE14高效毛细管电泳-雷杰.ppt.ppt

高效毛细管电泳 Capillary Electrophoresis 一、电 泳(eletrophoresis)：带电粒子在电场中的定向移动。 1937年，瑞典科学家Tiselius设计了世界上第一台电泳仪，建立了移界电泳法，并于1948年荣获诺贝尔奖。多年以来，电泳技术围绕制胶、电泳、染色三个技术环节，不断改进，以实现下列目标： 1、提高分辨率及灵敏度。 2、简化操作，缩短电泳时间。 3、扩大应用范围。 各类电泳技术已广泛应用于生命科学各个领域。 二、毛细管电泳(Capillary Electrophoresis) 毛细管电泳(CE)又称高效毛细管电泳(HPCE)，是指离子或带电粒子以毛细管为分离介质，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的液相分离分析技术。由于毛细管内径小，表面积和体积的比值大，易于散热，因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产生，这是CE和传统电泳技术的根本区别。 采用了0.05 mm内径的毛细管； 采用了高达数千伏的电压。 三、毛细管电泳基本原理 四、毛细管电泳仪器 2. 电动进样方式 TriSepTM-2010GV pCEC System 五、毛细管电泳分离模式 毛细管区带电泳 (Capillary Zone Electrophoresis，CZE) 毛细管胶束电动色谱 (Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography，MEKC，MECC) 毛细管凝胶电泳（Capillary Gel Electrophoresis，CGE） 毛细管等电聚焦（Capillary Isoelectric Focusing，CIEF） 毛细管等速电泳（Capillary Isotachorphoresis，CITP） 毛细管电动色谱（Capillary Electrokinetic Chromatography，CEC） 六、实验内容 见补充讲义。 成人与继续教育学院 成人与继续教育学院 职 职 业 业 教 教 育 育 学 学 院 院 Experimental Center for Chemical education, FDU Experimental Center for Chemical education, FDU 化学教学实验中心 而 笃 志 学 问 而 近 思 博 切 而 笃 志 学 问 而 近 思 博 切 复旦大学 化学教学实验中心雷 杰 （一） 基本概念 毛细管有效长度 (l, cm) 毛细管的入口端到检测窗口的距离； 迁移时间 (t, min) 带电粒子在电场作用下做定向移动的时间； 电泳速度（v cm/s） 在单位时间内，带电粒子定向移动的距离； 电场强度(E, V/cm) 电场强度/毛细管总长度； 电泳淌度（m cm2/(V·s) ）带电粒子在毛细管中定向移动的速 度与所在电场强度之比； 毛细管总长度 (L, cm) 毛细管 (内径50 mm , 外径375 mm ) 毛细管全长（L） 入口到检测窗总长（l） 当固体与液体接触时，固体表面带一种电荷，因静电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形成双电层。 当液体两端施加电压时，就会发生液体相对于固体表面的移动，这种现象叫电渗现象。 电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（electroosmotic flow ，简称EOF）。 （二）电渗现象与电渗流 （electroosmosis and electroosmotic flow） 毛细管电泳中，溶液整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动，谱带展宽很小； 液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的2倍，引起谱带展宽较大。 石英毛细管柱，内充液pH 3时，表面电离成-SiO-，管内壁带负电荷，形成双电层后，电渗流方向为由正极到负极。 电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的5～7倍； 各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为： ν+ =ν电渗流 + ν+ef 阳离子运动方向与电渗流一致； ν- =ν电渗流 - ν-ef 阴离子运动方向与电渗流相反； ν0 =ν电渗流 中性粒子运动方向与电渗流一致； （1）可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离； （2）改变电渗流的大小和方向可改变分离效率和选择性，如同改变LC中的流速； （3）电渗流的微小变化影响结果的重现性； 在HPCE中，控制电渗流非常重要。 Si O Si Si O Si Si O Si O Si O O O O O + - Na+ Cl-