含碘乳过氧化物酶―过氧化氢―硫氰化物系统对变异链球菌致龋性影响.docVIP

含碘乳过氧化物酶―过氧化氢―硫氰化物系统对变异链球菌致龋性影响 　　[摘要] 目的 研究含不同浓度碘（I-）的乳过氧化物酶-过氧化氢-硫氰化物系统（LPO-H2O2-SCN-）对变异链球菌生长、黏附、产水不溶性细胞外多糖以及葡萄糖基转移酶（GTF）活性的影响。方法 选用S. mutans ATCC 25175为实验菌株。采用菌落形成单位（CFU）计数法进行生长实验；用分光光度计法测定细菌的黏附抑制率；用蒽酮法测定水不溶性细胞外多糖的质量浓度；用蒽酮法测定还原糖量，计算GTF活性。结果 随着I-浓度的增高，含I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统对S. mutans致龋力的抑制作用增强。当I-≥100 μmol?L-1时，对S. mutans的生长抑制明显高于对照组（P0.05）；且当I-≥1 000 μmol?L-1时，对S. mutans的生长抑制显著高于以硫氰酸盐（SCN-）为单底物的实验组（P0.05）；当I-≥100 μmol?L-1时，对S. mutans的黏附抑制率达到50%以上，水不溶性细胞外多糖生成量明显减少（P0.05），GTF活性也明显降低（P0.05）。结论 通过增加I-的浓度，可以抵消生理浓度的SCN-的抑制作用，使含I-的LPO-H2O2-SCN-系统能显著抑制变异链球菌的生长、黏附、水不溶性细胞外多糖生成和GTF活性。 　　[关键词] 变异链球菌； 乳过氧化物酶； 碘离子； 硫氰酸根离子； 葡萄糖基转移酶； 水不溶性细胞外多糖 　　[中图分类号] R 780.2 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2014.04.020 　　唾液过氧化物酶系统（peroxidase system，PS）是唾液中的抗菌成分，主要包括3个组分：过氧化物酶（peroxidase，PO）、过氧化氢（peroxide，H2O2）和底物，底物包括含硫氰酸根离子（thiocyanate，SCN-）、碘离子（iodine，I-）等的化合物。只有当3个组分都存在时，PS才具有活性。PO可催化H2O2将含I-、SCN-的底物分别氧化为次碘盐OI-、次硫氰酸盐OSCN-[1]。OI-和OSCN-均为强氧化剂，能氧化对巯基敏感的酶，干扰微生物代谢，有效抑制多种细菌和真菌的生长[2]。口腔PO主要存在于口腔唾液和龈沟液中，主要由唾液过氧化物酶（salivary peroxi-dase，SPO）和髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）组成。SPO和MPO不易获取，至今尚未得到纯品。乳过氧化物酶（lactoperoxidase，LPO）存在于乳汁中，因其来源广泛，容易获取，结构和功能与SPO非常相似，所以实验中多以LPO作为SPO的替代物。乳过氧化物酶系统（lactoperoxidase system，LPS）已应用于多种口腔保健品中[3]，这些口腔保健品中多以SCN-作为底物，I-的应用还较少。虽然I-氧化产物的抑菌效果远远超过SCN-氧化产物，但是唾液中固有的生理浓度的SCN-存在时会显著抑制LPO-I-的抗菌效应[4]，所以LPO-I-系统的抗菌效应未能得到有效的开发和利用。 　　本研究拟通过增加I-的量来抵消生理浓度SCN-对I-的抑制作用，从而探索有效发挥I-抗变异链球菌（Streptococcus mutans，S. mutans）作用的途径，并进一步研究含不同浓度I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统对S. mutans的黏附、葡萄糖基转移酶（glucosyltrans-ferase，GTF）活性和水不溶性细胞外多糖生成等多个致龋毒力因子的影响，为I-在防龋口腔保健中的应用和推广提供理论依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验菌株与主要试剂 　　S. mutans ATCC 25175（血清型C，由四川大学口腔疾病研究国家重点实验室提供）；脑心浸液补充（brain heart infusion-supplemented，BHI-S）琼脂培养基、脑心浸液（brain heart infusion，BHI）液体培养基（青岛高科园海博生物技术有限公司）；硫氰酸钾、碘化钾、30%H2O2（天津市福晨化学试剂厂）；LPO（Sigma公司，美国）；二硫苏糖醇（di-thiothreitol，DTT）（北京索莱宝科技有限公司）。 　　1.2 溶液Ⅰ的配制 　　溶液Ⅰ（当实验中底物为I-和SCN-时，pH值为6.5）配方[4]如下：9 mmol?L-1 Na2HPO4 0.651 g， 　　24 mmol?L-1 KH2PO4 0.656 g，1.5 mmol?L-1 MgSO4 0.036 g，67 mmol?L-1 Na2SO4 1.922 g，加蒸馏水溶解稀释至200 m