第5讲 基因工程的酶学基础 吴乃虎 基因工程原理讲义.docVIP

PAGE 第五讲 基因工程的酶学基础 吴 乃 虎 中国科学院遗传与发育生物学研究所 2005年8月 目 录 一、导言 1．基因工程诞生的理论基础 2．基因工程诞生的技术基础 3．基因克隆中涉及的主要的核酸酶 二、核酸内切限制酶与DNA分子体外切割 1．简介与定义 2．寄主控制的限制与修饰现象 限制与修饰 若干概念 限制与修饰现象的解释 限制与修饰现象的分子机理 寄主控制的限制与修饰的生物学作用 3．核酸内切限制酶的类型 I型核酸内切限制酶 II型核酸内切限制酶 4．Ⅱ型核酸内切限制酶的特点 基本特点 识别位点 平末端与粘性末端 限制酶的识别序列与切割频率 同裂酶 同尾酶 识别多核苷酸的限制酶 5．核酸内切限制酶的命名 命名原则 实际使用的名称 6．核酸内切限制酶对DNA的消化作用 (1)核酸内切限制酶同靶DNA序列之间的结合模型 (2)核酸内切限制酶对DNA分子的局部消化 (3)真核基因组DNA的酶切消化 (4)DNA的酶切消化体系 7．影响限制酶活性的生物因子及操作条件 (1)DNA的分子特性 (2)酶切消化反应温度 (3)DNA纯度 (4)影响限制酶活性的操作条件 三、DNA连接酶与DNA分子的体外连接 1．引言 2．DNA连接酶 定义 连接条件 最佳连接温度 影响连接反应的因素 3．粘性末端DNA片段的连接 连接过程 碱性磷酸酶的处理 4．平末端DNA片段