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浅析正交试验法优选叶下珠多酚的提取工艺 　　 [摘 要] 目的——筛选出叶下珠总多酚的最佳纤维素酶法提取工艺。方法——用正交试验法进行了提取工艺的研究，并用普鲁士蓝法对叶下珠提取液的总多酚含量进行了测定。结果——λmax=695nm，平均回收率为98.73%，RSD=2.85%。叶下珠总多酚的最佳提取工艺为：加酶量为2.0%，提取时间为2.0h，温度为60℃，pH值为5.0，提取率可达10.00%。结论—— 该方法简单，快速，准确，为从药材或制剂中提取叶下珠总多酚提供了参考。　　[关键词] 叶下珠；纤维素酶；总多酚 ；正交实验法；提取工艺　　[中图分类号]S792.95 [文献标识码] A [文章编号]　　[作者简介] 杨再雍(1980—)，男，广西百色人，广西大学化工学院硕士研究生，研究方向：中草药的提取与分离；刘琨(1962—)，女，博士，广西大学化学化工学院教授，研究方向：化学工程与工艺。　　叶下珠又名珍珠草,为大戟科柚柑属植物的全草, 最早收载于《生草药性备要》中, 具有平肝清热、利水解毒和明目等功效之效, 主要用于治疗肠炎、腹泻、肝炎、痢疾、尿路感染、无名肿痛等疾病[1,2]。现代药理实验证明叶下珠具有极强的抗乙肝病毒和保肝作用[3,4]。XX年8月广西医科大学完成“抗乙肝表面抗原中草药的筛选”工作，对200种中药进行体外、体内研究证实，只有珍珠草和五倍子对乙肝表面抗原有效[5]。仲英[6]等通过对叶下珠系统的化学药理研究及初步临床观察,充分显示了叶下珠的抗乙肝病毒和保肝活性,且毒性较低,是一种很有开发前景的中药。　　文献报道，叶下珠中所含的主要活性成分为没食子酸、短叶苏木酚酸和鞣云实精等多酚类化合物。研究发现多酚类化合物可以延缓肿瘤的发作,抑制肿瘤的形成,提高认知功能,抑制低密度脂蛋白LDL氧化及抑制血小板凝集等。本研究通过正交试验，采用纤维素酶法对叶下珠总多酚的提取工艺条件进行研究,旨在为进一步开发利用叶下珠资源和叶下珠保健食品提供一定的理论参考。　　1 仪器、试剂和样品　　1.1 仪器　　PHS-3C精密pH计；UV-2800A型紫外可见分光光度计仪器有限公司）；T-500型电子天平有限公司，常熟双杰测试仪器厂）；旋转蒸发器RE-52A；微型万能粉碎机。　　1.2 试剂　　纤维素酶(上海源聚生物科技有限公司)，活力为750u/mg；没食子酸标准品；其它试剂均为分析纯。　　1.3 样品　　珍珠草，经广西药用植物园鉴定。　　2 方法与结果　　2.1 方法　　2.1.1 工艺流程　　叶下珠干品→粉碎过筛(取40～60目)→称量→加水→调pH值→加入一定量的酶搅匀→提取→离心过滤→正丁醇萃取→浓缩干燥→提取物　　2.1.2 测定方法　　采用普鲁士蓝方法测定了叶下珠中总多酚的含量。其反应原理为酚羟基具有还原性，能将Fe(CN)63-还原成Fe(CN)64-，还原产物Fe(CN)64-接着与Fe3+反应生成Fe[Fe(CN)6]3(普鲁士蓝)供定量测定。　　2.1.3 对照品溶液的配制　　精密称取没食子酸对照品25mg于50mL量瓶中,30%甲醇水溶解并加至刻度, 得到0.5mg/mL的对照品溶液。精密吸取该溶液1mL于10mL量瓶中, 加入30%甲醇水至刻度, 配成50ug/mL对照品溶液。　　2.1.4 标准曲线的绘制　　精密吸取上述对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于25mL 量瓶中, 依次加入0.100mol/L 三氯化铁溶液0.5mL、0.008mol/L铁氰化钾溶液0.5mL 和0.10 mol/L 盐酸溶液0.5mL , 定容, 得到不同浓度的对照品溶液。同时在25mL量瓶中加入0.100 mol/L 三氯化铁溶液0.5mL、0.008 mol/L 铁氰化钾溶液0.5mL 和0.10mol/L 盐酸溶液0.5mL , 定容后得到空白溶液。随行空白, 在695nm 波长处测定吸光度。以对照品的质量浓度为纵坐标, 吸光度为横坐标, 绘制标准曲线, 得线性回归方程C=2.1061A-0.0612, r=0.9992, 结果表明没食子酸在0.4～2.0ug/mL时,质量浓度与吸光度呈良好的线性关系。　　2.1.5 供试品溶液的制备　　取珍珠草纤维素酶法提取物0.1g, 精密称量, 加入40mL30%甲醇水, 置水浴中