增殖和抑制定性观察和定量检测,评价样品对细胞毒性.pptVIP

简述：本试验是将供试品浸提液与特定细胞系接触，通过对细胞死亡、增殖和抑制的定性观察和定量检测，评价样品对细胞的毒性作用及程度。 1、培养皿及枪盒用报纸包扎好，离心管的盖子拧开半圈，镊剪和离心管放入金属盒中，并将金属盒一侧的孔打开一半，将上述器具同置于压力蒸汽灭菌器内121℃灭菌30min。 2、灭完之后，放入超净工作台用风机吹30min。 ㈠ 、浸提液制备： 按下述规定将样品置离心管中浸提24h： 规则样品： a、x（样品厚度）＜0.5mm时，按 6cm2/ml浸提 b、0.5mm ＜x＜1mm时，按3cm2/ml浸提 C、x＜1mm时，按1.25cm2/ml浸提 不规则样品: 按2g/ml浸提 ㈡、细胞悬液制备：将生长旺盛的细胞用胰酶消化后，加入培养液中止消化，吸管吹打混匀后滴于计数板上，于倒置荧光显微镜下计数四角的4个大方格内的细胞（对大方格内的边缘压线细胞按数上不数下，数左不数右的原则进行计数）： 细胞密度=(4个大方格内细胞数/4) ×104 若实测细胞密度为8 ×105，而实验要求的密度为2× 104则应稀释40倍，96孔板用72个孔，每孔加100ul共需加7200ul，实际需配10ml细胞悬液（以防不够）。 由稀释倍数知需取0.25ml细胞悬液（可以适当多取点），取9.75ml培养液，放入培养皿中混匀（用前将培养皿用培养液清洗一下，使细胞更快的