离心技术在植物病理学中应用.pptVIP

不要拆卸超速适配器 Fig. 1-2-3. Overspeed Adapter and Disk 离心管（瓶）的摆放方式 速度时间的调整 温度、加速、减速调整 超速离心机的操作程序 选择与所用转头相对应的离心管，按要求装入样品，在天平上两两调平衡后，对称放入转头中。 打开电闸开关及离心机电源开关。 打开离心机舱盖，用手托着角转头放在离心舱内的转轴上，注意一定要对正放好。 关上离心机舱盖。 设置运行条件：角转头的“ACCEL”和“DECEL”为9，水平转头的“ACCEL”和“DECEL”为8，按一下“ACCEL”或“DECEL”后，用上下键选择后按“ENTER/ RECAL”；设置“SPEED”（速度）、“TIME”（时间）、“TEMP”（温度）方法同上。 按下“VACUUM”抽真空，直至“VACUUM”左右两个灯全亮了，表明真空达到要求。 按“ENTER/RECAL”显示已设置的运行条件。 按“START”开始。 运行结束，至“SPEED”显示为零时，按一下“VACUUM”放真空，至无嘶嘶声为止。 打开离心机舱盖，取出转头放在转头座上，取出样品。 关上离心机舱盖，关闭电源，关上电闸。 超速离心机使用注意事项 样品一定要平衡，一一对应放入转头内。严禁在离心仓内加样品。 离心管的选择和加样一定要符合要求，不同的转头使用不同的离心管，角转头用薄壁管或厚壁管，薄壁管装样品时必须装满，且用专用的工具拧紧；厚壁管装样品不得超过最大允许体积；水平转头用PA管，注意离心管对酸碱的稳定性。 使用水平转头时，要将离心管放在吊蓝内平衡，吊蓝和盖和下面部分上的标号要对应，拧紧到盖的凹点与下面部分的小圆点对应为止，不能用力过大。吊蓝要挂在转头的相应位置上，要对号入座，吊蓝要挂住，放到机舱后用小镜子再检查一下是否挂好，防止在离心过程中飞出打坏离心机舱。 要抽真空完全后才能按“START”。 待“SPEED”为0时，按“VACUUM”放气。 拿放转头时，注意角转头要托着转头的主体，而不要提上面的把手；水平转头要一手提上面的提手，一手托着，另外，离心时必须将上面的提手拿下。 每次离心完毕后，注意将转头取出，如有液体散落及时清理，关上离心机舱盖，关上电源和电闸。 转头是离心机中须重点保护的部件，搬动时要小心，不能碰撞，避免造成伤痕，转头长时间不用时，要涂上一层上光腊保护，严禁使用显著变形、损伤或老化的离心管。 若要在低于室温的温度下离心时。转头在使用前应放置在冰箱4度或置于离心机的转头室内预冷。 每个转头各有其最高允许转速和使用累积限时，使用转头时要查阅说明书，不得过速使用。每一转头都要有一份使用档案，记录累积的使用时间，若超过了该转头的最高使用限时，则须按规定降速使用。 离心过程中不得随意离开，应随时观察离心机上的仪表是否正常工作，如有异常的声音应立即停机检查，及时排除故障。 高速离心机外形结构 超离心实验举例 利用差速离心的方法提纯WYMV 用匀浆器将病叶匀浆，加入3倍体积的柠檬酸缓冲液（W/V）和0.1%的巯基乙醇。 双层纱布过滤，加入1/4体积的氯仿，低温搅拌10分钟。 静置半分钟后倒出上清，8000 rpm离心20分钟，取上清加PEG沉降后10000rpm离心20分钟。 取上清，40000rpm 超离1小时（每管铺5ml蔗糖垫），去上清，沉淀用缓冲液悬浮，10000rpm高速离心20分钟，取上清。 40000rpm 超离１小时去蔗糖，沉淀同上悬浮。 使用水平转头精提纯：每4ml病毒悬浮液加1.33g CsCl，29000rpm 超离18小时。 用针头将病毒带取出，加入缓冲液稀释5倍，40000rpm 超离1小时，沉淀溶于1ml缓冲液中，-20℃保存。 小麦黄色花叶病毒 Wheat yellow mosaic virus 分子生物学常用小仪器使用规程 含超净工作台 光照培养箱 制冰机 组织匀浆机 纯水器等 离心技术原理及其在植物病理学研究中的应用 主要内容 离心技术的定义和应用 离心技术的基本原理 离心机的主要构造和类型 三种常用离心方法 超速离心机的结构与操作 注意事项 高速离心机的结构与使用 离心技术应用举例 病原生物样品的分离和制备 离心技术，生物样品悬浮液在高速旋转下，由于巨大的离心力作用，使悬浮的微小颗粒以一定的速度沉降，从而与溶液得以分离，而沉降速度取决于颗粒的质量、大小和密度。主要用于各种生物样品的分离和制备。 离心技术在生物科学研究领域，应用十分广泛，每个分子生物学实验室都要装备多种型式的离心机。 离心技术的基本原理 当一个粒子（生物大分子或细胞器）在高速旋转下受到离心力作用时，此离心力“F”由下式定义，即： F = m·a = m·ω2 r a — 粒子旋转的加速度