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法医DNA分析的主要技术及其应用
法医DNA分析的主要技术及其应用
法医DNA分析,通常称为DNA鉴定,自1985年英国leister大学的遗传学家Alec Jeffreys教授创立DNA指纹分析技术以来,因其拥有极高的识别率和灵敏度,在短时间内就得到了飞速的发展和广泛的应用。作为目前已知的个人识别和血缘鉴定的最有效方法,DNA分析已经成为世界各国刑事侦查和司法审判获取证据重要的、不可或缺的科学技术手段。 DNA是脱氧核糖核酸的英文缩写。它主要由四种碱基,即腺嘌呤A、胸腺嘧啶T、鸟嘌呤G和胞嘧啶C组成,是所有生物的基本遗传物质。遗传物质包含了任一机体发育和实现其组织功能所必需的全部信息。除同卵双生外,每个生物、也包括人的这四种碱基排列顺序――DNA碱基序列是不同的,独一无二的。人类DNA含有3.2*109个碱基对,其中约99.9%的DNA序列是相同的,另外的0.1%在个体间存有差异。这些DNA序列上的差异,有的在个人的特征如眼睛、发色和肤色等表现出来,更多的则不表现在个人的生理外观特征上,必须用实验室的特殊技术才能测定出来,这就是法医DNA分析技术。较成熟的技术主要有以下几种。 DNA指纹技术:DNA指纹技术是1985年英国遗传学家Alec Jeffreys创立的。利用限制性内切酶将人类基因组DNA切割成不同长度的限制性片段,经电泳分离后,用特异探针杂交,检测出不同片段长度的等位基因,获得个体特异的DNA指纹图谱,就叫DNA指纹技术。DNA指纹图谱含有许多片段,在3-23kb范围内,有10-30条片段,图谱极其复杂且携带大量的遗传信息,具有人类遗传标记的各种特征。DNA指纹图谱中的大多数谱带,尤其是4kb以上的大片段以均等机会由亲代传递给子代,子代指纹图谱的所有谱带都可以在双亲的指纹图谱中找到,其传递符合孟德尔遗传定律,可以进行亲权鉴定。研究表明,DNA指纹图谱无论在体细胞还是在生殖细胞中都是稳定的,同一个体的不同组织的DNA指纹图谱都是相同的,例如同一个体的血液、精液、毛发、肌肉骨骼等组织间无差异,并且个体间有高度特异性,个体与个体间的DNA完全不一致,可以进行个体识别。Jeffreys将该技术成功运用于一起移民侵权案件,确定了母子血缘关系,改变了先前法医物证鉴定只能排除不能认定的历史,开创了法医物证鉴定理论和实践发展的新纪元。 STR分析技术:也叫微卫星序列分析技术或短串联重复序列分析技术,重复单位长度为2-6bp。STR基因座是法医DNA分析中最常用的一类遗传标记。STR基因座具有以下特点:STR基因座在人类基因组中分布广泛,据估计,人类基因组每20bp就有一个3bp或4bp串联重复序列的STR位点,多态性基因座数量多;等位基因片断长度一般小于400bp,易于扩增,对检材的质量要求不高,容易适用于陈旧、降解生物检材的DNA分析;STR基因分型检测的灵敏度高,所需的检材DNA量更少,适用于微量、超微量检材的DNA分析;STR基因座的等位基因片段较小,序列较短,扩增条件相差不大,可在同一个反应体系中进行复合扩增,操作程序简化,提高工作效率。STR分析方法简便、判型准确,分型程序明确规范,所得分型结果图形简单,有利于实现DNA分型标准化和自动化,便于DNA分型数据的计算机存储、联网检索。STR分析技术大大提高了STR系统的个体识别能力,已经成为法医DNA鉴定领域和DNA数据库建设首选技术。 线粒体DNA分析技术:线粒体是存在于细胞质的一个含有双层膜的重要细胞器,是细胞的氧化中心和动力站。几乎人体所有细胞中均有线粒体,但是不同组织细胞中线粒体的数目有所差异。线粒体有自己的遗传系统,线粒体DNA是人类第二套基因组DNA,也是人细胞中除核之外唯一含有DNA的细胞器。由于受精卵中的线粒体几乎全来自卵细胞,所以线粒体遗传系统往往表现为母系遗传,其家族中外祖母和外孙女、姨与外甥女、兄弟姐妹之间的线粒体序列相同,可以进行母子女鉴定、身源鉴定,尤其在父母无法提供物证的情况下,运用线粒体分析进行家族个人识别非常成功。由于线粒体DNA拷贝数比核DNA多许多倍,灵敏度高,抗降解能力强,对检材样本质量要求不高,可以适用于对陈旧腐败检材的分析。线粒体DNA分析最大的优点是可以解决毛干、指甲、骨骼等无核生物组织或极微量检材的DNA鉴定难题,进行个体遗传分析与亲子鉴定,具有STR-DNA分析无法比拟的作用和应用价值。因其母系遗传方式和特
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