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生物样品分离技术进展 药学院 彭 彦 药学院 内 容 一、生物样品预处理 二、双水相萃取 三、反胶团萃取 四、超临界流体萃取 五、固相萃取 六、分子印迹技术 一、生物样品预处理 • 生物样品预处理（样品的制备）—— 对样品采用合适分解和溶解及对待测组 分进行分离、纯化、浓缩的过程,使被测组 分转变成可测定的形式以进行定量、定性 分析检测。 • 样品前处理的目的—— 消除基体干扰， 提高方法的准确度、精密度、选择性和 灵敏度。 • 生物样品的预处理是体内药物分析的一 个重要步骤，也是整个分离分析过程中 最烦琐的一个环节。 二、双水相萃取 （Aqueous two-phase Extraction ） • 双水相萃取——利用物质在不相溶的，两水相间分配系数 的差异进行萃取的方法。 • 将两种不同的水溶性聚合物的水溶液混合时, 当聚合物浓度 达到一定值,体系会自然地分成互不相溶的两相。 • 这一现象早在1896 年就由Beijerinck 观察到了, 当明胶与琼 脂或明胶与可溶性淀粉的水溶液混合时,就得到一个浑浊不 透明的溶液,它随之分成两个液相,这就是双水相体系。 1. 双水相的形成 如：聚乙二醇/ 葡聚糖 上、下相 hydrophobic hydrophilic 2009-11-20 6 2. 常见的双水相系统 2009-11-20 7 3. 萃取原理 • 生物物质进入双水相体系后，由于表面性 质、电荷作用和各种力（如憎水键、氢键 和离子键等）的存在和环境因素的影响， 使其在上、下相中分配系数K 不同, 因而双 水相体系对各类蛋白质的分配具有较好的 选择性。 4. 双水相系统影响因素 （1）聚合物及其分子量的影响：（选择性） （2 ）pH 值的影响 （3 ）离子环境对蛋白质在两相体系分配的影响 （4 ）温度的影响 5. 具体实验步骤 • 配制一系列不同浓度、pH及离子强度的双水相, 每个双水相改变一个参数。 • 加入料液, 再加水使整个系统质量达到一定量， 离心管封口后充分混合; • 在1800~2000g下离心3~5min ，使两相完全分离; • 小心地用吸管或移液管将上相和下相分别吸出， 测定上、下相中目标产物的浓度或生物活性。 • 再结合其他生化分离方法，从分开的两相中进一 步分离纯化，获得所需的目标产物。 6. 应用 （1 ）双水相萃取细胞中酶的流程图 （2 ）小分子化合物富集分离 微胶囊双水相萃取柑桔精油工艺流程图 2009-11-20 12 7. 双水相萃取的优点 • 平衡时间短、含水量高、界面张力小，特别适 合于生物活性物质(蛋白质、酶、核酸、人生 长激素、干扰素等) 、天然植物中提取有效药 用成分的分离纯化。 • 分离时间短，目标产物的分配系数一般＞3 ， 即收率较高。 • 操作简便，易于放大。 2009-11-20 13 三、 反胶团萃取法