1-1DNA重组的技术基本工具.pptVIP

一、基因工程概念 限制酶的种类与命名： 迄今已从近300种微生物中分离出约4000种限制酶。 特定的核苷酸序列 黏性末端和平末端 基因进入受体细胞的载体 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 作为载体没有切割位点将怎样？ 目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ 如果载体对受体细胞有害将怎样？ 作为载体的必要条件 能自我复制 有切割位点 能与目的基因结合 能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达； 有遗传标记基因 对受体细胞无害 比较容易得到 * 能发光的水母 不能发光的热带斑马鱼 能否让热带鱼也能发光? 设想 能发荧光的热带斑马鱼 普通热带斑马鱼是不发荧光的 能产生人胰岛素的大肠杆菌 用已学知识试着分析，基因工程如何操作？ 提取 培育转基因大肠杆菌的简要过程 普通大肠杆菌 (不能分泌胰岛素) 人体组织细胞 胰岛素基因 导入 转基因大肠杆菌 (含胰岛素基因，能分泌胰岛素) 1.什么是基因？提取的意思是？ 2. 基因直接导入大肠杆菌后还能正常转录翻译吗? 3.胰岛素基因在人体细胞中表达的是胰岛素，在大肠杆菌体内表达的还是胰岛素吗？ RNA DNA 蛋白质 转录 翻译 复制 培育转基因大肠杆菌的关键步骤 1.ONE 胰岛素基因从人体细胞内提取出来 2.TWO 胰岛素基因与运载体DNA连接 3.THREE 胰岛素基因导入受体(大肠杆菌)细胞 基因的 “分子手术刀” 基因的 “分子缝合针” 基因的 “分子运输车” 基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。 通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状（目的）。 原 理： 操作水平： 结 果： 目的基因 供体细胞 受体细胞 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。 获得新性状 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。 约4000种。 (1)来源： (2)种类： (3)作用： (4)结果： 形成两种末端 1. “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 EcoRⅠ SmaⅠ 粘质沙雷氏杆菌 （Serratia marcesens） 大肠杆菌 （Escherichia coli R） 练习：流感嗜血杆菌的d菌株( Haemophilus influenzae d )中先后分离到3种限制酶，则分别命名为: HindⅠ、HindⅡ和HindⅢ 限制酶的作用特点： ①不同限制酶的识别与切割位点不同，体现了酶的专一性； ②一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的位点上切割DNA分子，断开两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 （a） 限制酶所识别的序列，大多由6个核苷酸组成，少数由4、5或8个核苷酸组成，无论哪种序列，都可以找到一条中心轴线，中心轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称、重复排列的，即序列表现为中心对称。 只能在特定位点切割。 课本P7：思考与探究1 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 练习使用EcoRI 剪切目的基因 GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 黏性末端 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 磷酸二酯键 DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？ DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 双链 单链 连接部位 在两DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键 运载体的作用有哪些？ 作用一：作为运载工具，将外源基因(抗虫基因)转