第十五节 酵母基因工程.pdfVIP

15章 酵母基因工程 o 酵母基因工程的发展 o 酵母表达系统 o 酿酒基因工程的应用 15.1 酵母基因工程的发展 o 酵母菌是一类群体庞大的单细胞真核微生物， 种类繁多，至少包括80个属，600多种，10 000 多菌株。 o 酵母菌有完整的亚细胞结构和严谨的基因表达 调控机制，它既能通过有丝分裂进行无性繁 殖，也可通过减数分裂实现有性繁殖。 1 15.1.1 酵母基因工程的优点 ①是真核生物，大多具有较高的安全性； ② 繁殖速度快，能大规模生产，具有降低基因工 程产品成本的潜力； ③ 将原核生物中已知的分 和基因操作技术与真 核生物中复杂的转译后修饰能力相结合，能方 便地用于外源基因的操作； ④ 采用高表达启动 ，可高效表达目的基因，而 且可诱导调控； ⑤ 提供了翻译后加工和分泌的环境，使得产物与 天然蛋白一样或类似； ⑥ 酵母菌可将表达的外源蛋白与末端前导肽融合，指 导新生肽分泌，同时在分泌过程中可对表达的蛋白 进行糖基化修饰； ⑦ 不会形成不溶性的包涵体，易于分离提纯； ⑧ 移去起始甲硫氨酸，避免了在作为药物使用中引起 免疫反应的问题； ⑨ 酵母菌 （主要是酿酒酵母）已完成全基因组测序， 它具有比大肠杆菌更完备的基因表达调控机制和对 表达产物的加工修饰及分泌能力； ⑩ 酵母可进行蛋白的N-乙酰化、C-甲基化，对定向到 膜的胞内表达蛋白具有重要作用。 2 15.1.2 发展现状 o 在酵母基因工程中发展和应用较多的酵母: 酿酒酵母 乳酸克鲁维酵母 （Kluyveromyces lactis） 巴斯德毕赤酵母 （Pichia pastoris） 多形汉逊酵母 （Hansenula polymorpha） 烷烃利用型降脂耶氏酵母 （Yarrowia lipolytica） 粟酒裂殖酵母 （Schizosaccharomyces pombe） o 应用:改造酵母本身用以提高发酵性能和表达异源 蛋白两方面。 1．酿酒酵母自身的改造 ⑴ 将葡萄糖淀粉酶基因导入酿酒酵母，水解多糖 ⑵ 将外源的蛋白水解酶基因导入酿酒酵母,水解 麦汁中蛋白 ⑶ 将β-葡聚糖酶基因导入 母， 水解β-葡聚 糖 ⑷ 将ATP硫酸化酶和腺苷酰硫酸激酶基因在酿酒 酵母体内表达，促进SO 产生 2 ⑸ 将人血清清蛋白（HAS）的基因转化到酿酒 母 3 2．酵母表达异源蛋白 ⑴ 表达水平 o 酵母的高效表达:通过开发高效的启动 提高 和控制外源基因的转录水平；提高表达载体在 细胞中的稳定性；通过多次同源重组以及介导 的整合两种方式提高表达基因在细胞中的拷贝 数。 ⑵ 表达质量 o 提高 母的遗传稳定性。 o 根据表达蛋白的不同，选用不同的酵母宿主。 15.1.3 发展趋势 1．解决 母基因工程中还存在的缺陷 2．在人类基因组计划中的应用研究是一个重要的 发展方向 3．利用 母基因工程筛选更多的新药 4．改造酿酒酵母自身，降低生产酒精的成本 5．酵母的生理承受极限研究将引起人们的关注 4 15.2 酵母表达系统 15.2.1 酵母表达载体 典型的 母表达载体均为大肠杆菌和 母菌的穿梭 质粒。 o 原核部分：大肠杆菌中ori和抗生素抗性序列。 o 酵母部分：维持复制的元件，如附加型的2μm质 粒复制起点序列，或染色体的自主复制序列 （auto-replication sequence,