整体透明技术在植物生物学中的应用实例与其剖析.pdfVIP

植物学通报Chinese Bulletin of Botany 2007, 24 (4): 490497, .技术与方法. 整体透明技术在植物生物学中的应用实例及其剖析 1,2 1* 郝建华 , 强胜 1 南京农业大学杂草研究室, 南京 2 10095; 2 常熟理工学院生物系, 常熟 2 15500 摘要 通过采用不同的透明剂和透明方法, 对番茄 (Ly cop ercicon esculentum)侧根原基、加拿大一枝黄花 (Solidago canadensis)与一枝黄花(S. decurens)的亲和性识别反应和苏门白酒草(Conyza sumatrensis)的胚珠发育过程进行了观 察, 提供了整体透明技术在植物生物学中的应用实例, 简要回顾了该技术在植物生殖生物学中的应用和发展状况, 分析了该技 术在植物生物学应用中的优势和不足, 探讨了该技术应用中一些具体的技术环节, 如透明剂的选择和使用以及与特殊用途显 微镜的配合使用等方面的问题, 并对该技术的应用前景进行了展望。 关键词 显微技术, 植物生物学, 植物生殖生物学, 整体透明技术 郝建华, 强胜 (2007). 整体透明技术在植物生物学中的应用实例及其剖析. 植物学通报 24 , 4 90497 . 整体透明技术是植物生物学教学和研究中常用的一 黄群策, 2005; 李国平等, 2006)、胚囊发育和胚囊结构 种技术。植物组织或器官经过各种透明剂处理后, 由于 (Smith and Johnson, 1980; 杜中等, 1995; 任宏等, 透光性增加, 且由于不同组织的厚度和折射率的不同, 呈 1998; 张华华等, 2003; 郭海滨等, 2006)、受精与胚发 现出不同的形态。透明后的组织不经过染色或用不同 育(杨弘远, 1988; 刘向东等, 1993; 赵世绪等, 1993; 吴 的染料染色后, 利用明视野显微镜、相差显微镜(phase 晓东和杨世杰, 1998; 张华华等, 2006)、种子和果实的 contrast microscopy)、微分干涉差(differential inter- 形成(Shih et al., 1983; 陈庆亮等, 2005)等过程的观察。 ference contrast, DIC)显微镜 (又称Nomarski 相差显 整体透明方法作为植物生物学中的一种重要技术, 微镜, Nomarski contrast microscopy)、荧光显微镜 在我国的研究和应用报道较少。杨弘远(1988)在19 世 (fluorescence microscopy)和激光扫描共聚焦显微镜 纪80年代做了专题介绍后, 未见到有关此技术的系统性 (confocal laser scanning microscopy, CLSM)等, 可 报道。即使是在整体透明技术应用最广的植物生殖生 观察到通常不易观察到的组织和细胞。 物学领域, 整体透明技术也仅限于对成熟胚囊、胚和种 整体透明技术的优点在于: (1)可对组织和器官进行 子等胚胎学发育较后时期的部分报道(杨弘远, 1986; 赵 整体观察, 了解其中特定组织或细胞的三维结构, 即具有 世绪等, 1993; 杜中等, 1995; 任宏等, 1998; 吴晓东和 原位地形学(topograph)观察和指定性观察的优势(杨弘 杨世杰, 1998; 张华华等, 2003; 陈庆亮等, 2005; 郭海 远, 1986) 。在观察的基础上, 可进行必要的统计和测量 滨等, 2006; 张华华等, 2006), 对大孢子母细胞、四分 分析, 如对幼苗中的维管系统的分布(毕冬玲等, 2004) 以 体和单核胚囊等早期胚胎学事件的报道不多。国外一 及叶中分泌细胞团和分泌囊的观察等( 蔡霞和胡正海, 些作者对不染色或染色的材料, 结合微分干涉差显微镜 2000; 吕洪飞等, 200 1) 。(2)对一些较小的、制作切片 或激光共聚焦扫描显微镜研究了多种植物的生殖发育过 困难或用切片法观察效率低的材料, 用此法