专题五 DNA及蛋白质技术_百替生物.pdf

专题五 DNA 和蛋白质技术 【课题目标】 本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA 进行粗提取，了解DNA 的物理化学性质，理解DNA 粗 提取以及DNA 鉴定的原理。 【课题重点与难点】 课题重点：DNA 的粗提取和鉴定方法。 课题难点：DNA 的粗提取和鉴定方法。 【知识要点】 1. DNA 的物理化学性质，尤其是DNA 的溶解性； 2. 2.二苯胺法鉴定DNA 的方法和原理。 [学习导航] DNA 和蛋白质技术，包括DNA 的提取、蛋白质的提取、，是开展分子生物学研究的基本技术。本 专题将从基础入手，学习 DNA 的粗提取、血红蛋白的提纯。学习这些技术，不仅能够帮助学生初步 了解分子生物学的基本实验方法，而且能够巩固必修课中学习的有关DNA 和蛋白质的理论知识。 本专题的3 个课题相对独立，没有严格的先后顺序。课题 1 的操作难度不高，学生比较容易获得 结果。课题2 的操作难度也不高，但PCR 技术的原理是难点，学生要充分利用教材的图文资料，并且 在教师的引导下进行实验操作。课题3 的操作难度比较大，所以学生一定要在教师的精心指导下完成 操作。 课题1 DNA 的粗提取与鉴定 [导学诱思] 1．提取DNA 的方法 提取生物大分子的基本思路是 。对于DNA 的粗提取而言，就是要利用 、 等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA ， 去除其他成分。 1）DNA 的溶解性 DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的 中溶解度不同，利用这一 特点，选择适当的盐浓度就能使 充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 图5— 1 是DNA 在NaCl 溶液中的溶解度曲线，请根据曲线图， 思考： ①在什么浓度下，DNA 的溶解度最小？DNA 在NaCl 溶液中的溶解度是如何变化的？ ②如何通过控制NaCl 溶液的浓度使DNA 在盐溶液中溶解或析出？ 此外，DNA 不溶于 溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以 将DNA 与蛋白质进一步的分离。 2 ）DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解 ，但是对 没有影响。大 多数蛋白质不能忍受60—80oC 的高温，而DNA 在 以上才会变性。洗涤剂能够瓦解 ， 但对DNA 没有影响。 3 ）DNA 的鉴定 在 条件下，DNA 遇 会被染成 色，因此二苯 胺可以作为鉴定DNA 的试剂。 2 ．实验设计 1）实验材料的选取 凡是含有 的生物材料都可以考虑，但是使用 的生物组 织，成功的可能性更大。在下面的生物材料中选取适合的实验材料： service@100 鱼卵、猪肝、菜花（花椰菜）、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在 液体培养基的大肠杆菌 思考： 哺乳动物的红细胞的特点？ 2 ）破碎细胞，获取含DNA 的滤液 动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液 中加入一定量的 ，同时用 搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要 先用 溶解细胞膜。例如，提取洋葱的 DNA 时，在切碎的洋葱中加入一定的 和 ，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。 思考： ①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ ②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ ③如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响? ④此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 3 ）去除滤液中的杂质 阅读课本的三个方案， 思考： 为什么反复地溶解与析出DNA ，能