基因工程复习2课件.ppt

小思考：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体细菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。建立基因文库，便于随时获取目的基因。 小讨论：构建基因表达载体时，没有加入启动子。 小应用：基因治疗一般针对很难用一般药物进行治疗的遗传病。 1．基因拼接的理论基础 (1)DNA是生物的主要遗传物质。 (2)DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。 (3)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。 2．外源基因在受体内表达的理论基础 (1)基因是控制生物性状的独立遗传单位。 (2)遗传信息的传递都遵循中心法则阐述的信息流动方向。 (3)生物界共用一套遗传密码子。 3．基因工程的基本工具 ①DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 ②一般来说，天然运载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和需要，对某些天然的运载体进行人工改造。 ③限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外，这样才能保证标记基因的完整性，有利于对目的基因的检测。 ④限制酶和DNA连接酶的比较 【例1】　(2009年浙江高考)下列关于基因工程的叙述，错误的是 (　　) A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达 解析：目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物；基因工程中常用的工具酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶；大肠杆菌为原核生物，不含有内质网和高尔基体等细胞器，不能对蛋白质进行加工，其合成的胰岛素原无生物活性。运载体中的抗性基因为标记基因，其作用是有利于筛选含重组DNA的细胞，不能促进目的基因的表达。 答案：D 评析： 本题考查基因工程的工具、目的基因的来源及标记基因的作用。 ?变式1：除了下列哪一项之外，其余的都是基因工程的运载体所必须具备的条件 (　　) A．能在宿主细胞中复制并保存 B．具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 C．具有标记基因，便于进行筛选 D．是环形状态的DNA分子 解析：原核细胞如细菌的核DNA也是环状DNA，但不能作运载体，因为它不具备A、B、C三个条件。 答案：D 1．目的基因的获取 (1)从基因文库中获取目的基因 优点：有了基因文库，就可以随时从中提取所需要的目的基因，引入受体细胞使之表达。 (2)人工合成目的基因 (3)利用PCR技术扩增目的基因 ①PCR：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。PCR扩增是获取目的基因的一种非常有用的方法，也是进行分子鉴定和检测的一种很灵敏的方法。 ②目的：通过指数式扩增获取大量的目的基因。 2．基因表达载体的构建 (1)目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，并使目的基因能够表达和发挥作用。 (2)基因表达载体的组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因＋复制原点。 ①启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端。它是RNA聚合酶识别、结合的部位。 ②终止子：一段有特殊结构的DNA短片段，位于基因的尾端。作用是使转录过程停止。 ③标记基因：一般为抗生素抗性基因或荧光基因等，其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因(目的基因是否导入成功)。 (3)基因表达载体的构建方法 3．将目的基因导入受体细胞 (1)目的：目的基因进入受体细胞内并在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 (2)受体细胞种类不同，导入方法不同 (3)受体生物不同，所用的受体细胞种类也不相同 a．植物：可以是卵细胞(受精卵)、体细胞(可经组织培养成为完整植株)。 b．动物：受精卵(因为体细胞的全能性受到严格限制)。 (4)转化实质：目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。 4．目的基因的检测与鉴定 ①比较基因、目的基因、基因文库 a．基因是有遗传效应的DNA片段，是控制性状的遗传物质的结构和功能的基本单位，基因的脱氧核苷酸序列代表遗传信息。 b．目的基因是指基因工程操作中需要的外源基因，它是编码某种蛋白质的结构基因，如生物的抗逆性基因、抗虫基因等。 c．基因文库：是将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中而储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。 基因文库就相当于某种生物的基因仓库，储备着大量的同种基因，为获得大量的目的基因做准备。 ②DNA复制与PCR技术 ③插入的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作运载体的质粒的插入部位前须有启动子，后须有终止子。 ④两次使用的限制酶为同一种酶，这样形成的黏性末端碱基之间互补，便于连接。 ⑤在整个工程中，只有第三步将目的基因导入受体细胞过程中不发生碱基互补配对，其他步骤均发