第三课基因工程简介--旧人教版.ppt

发明PCR，公司奖励10,000美元奖金 专利卖给Hoffmann-La Roche公司卖了3亿美元 Mullis得了1993年诺贝尔化学奖 利用PCR技术扩增目的基因 PCR扩增上亿个拷贝（几个小时），而癌症细胞以高复制能力而著称，完成同样的多制工作一个癌症细胞需要整整一个月。 化学合成法：前提 a.如果目的基因的全序列是已知的，用化学合成法直接合成。 b.DNA自动合成仪可合成不超过50个碱基寡聚核苷酸单链。 c.用于核酸杂交的探针，分子克隆的人工接头，PCR扩增的引物。 d.由单链寡聚核苷酸通过退火直接装备双链DNA片段或基因。 基因文库，理论上它含有某一生物染色体的所有DNA片段，包括基因编码区和间隔区DNA。由鸟枪法和cDNA法构建。鸟枪法构建的为基因组文库 (Genomic Bank)。 cDNA文库,含有生物体的全套蛋白质编码序列,不含DNA调控序列从cDNA文库筛选蛋白质编码基因，比从基因文库筛选要简捷。 目的基因与运载体的结合——表达载体的构建 目的基因 启动子和终止子 标记基因 核糖体结合位点的强弱 克隆基因的拷贝数 所表达的蛋白质的最终细胞定位 翻译的效率 所表达的蛋白质的稳定性 目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，遗传到下一代，同时使目的基因表达发挥作用。 什么是强启动子？ 与RNA聚合酶结合能力强,因此，其介导的基因转录水平高、频繁 持续强启动子表达的弱点 能量枯竭导致宿主细胞生长受阻 质粒容易丢失 将目的基因导入受体细胞 目的基因导入微生物细胞：细菌转化五个步骤 1）感受态的形成 　 感受态细胞能分泌一种小分子量的激活蛋白，感受因子，诱导特征性蛋白（细胞溶素）合成，使细胞壁部分溶解,暴露膜上DNA结合的蛋白。 2）转化因子结合 受体菌膜上的结合蛋白与转化因子的双链DNA结构特异结合。单链DNA,RNA,DNA-RNA杂合双链都不能结合在膜上。 3）转化因子吸收 双链DNA结构与蛋白特异结合后，激活核酸酶，一条链被降解，另一条被吸受到受体菌中。 4）整合复合物前体形成 整合复合物前体：进入受体细胞单链DNA与蛋白特异结合。保护单链DNA不被酶降解。 5）转化因子单链DNA整合 单链DNA通过同源重组，置换受体染色体同源区域，形成异源杂合双链DNA结构。 将目的基因导入植物细胞 土壤农杆菌法 基因枪法 花粉管通道法 1987年，周光宇中国的转基因棉花 原理不明 土壤农杆菌法 冠瘿病 侵染双子叶植物 基 因 枪 法 打一枪即可10000个整合细胞/枪 火药、气压等 300-600米/秒 DNA随机插入，原理不明 目的基因导入动物细胞 如：显微注射法 DNA损失少 无需选择标记基因整合效率高 目的基因的检测和表达 基因克隆→用于在选定的host中表达 但是 克隆的基因不一定能表达 克隆载体不一定是好的表达载体 目的基因是否进入受体细胞，你如何去察觉？ 1。抗药性筛选法 2.营养缺陷性筛选法 载体分子携带营养成分（氨基酸，核苷酸）的生物合成基因，受体细胞基因突变，不能合成营养物质。两者构成营养缺陷。 在缺少营养物质的培养基上受体细胞不存活，存活的是转化子。 3.显色模型筛选法 LacZ,?-半乳糖苷酶基因，用于筛选重组子。 4.植物细胞中的报告基因：颜色、发光、抗生素、除草剂等 ； / jch58kcf 子？往好处想，老太太一日不死，两位太太再大也大不过老太太去，嘉颜还在老太太院子里，平常跟着老太太享享福，有什么事，出去，阖府还都跟敬老太太似的敬着她，有些银钱财物的孝敬是不来了，但也省去很多劳碌，对养身有益。洛月交付了桩差事，回转门来，厚棉门帘子一动，带进来一丝冷冽，她仔细把门帘子放好，抬头看宝音神色，问：“姑娘这几日有心事？”还不是七王爷那档子事……苏小横把担子揽了过去，也没深责怪宝音。宝音总觉得眼皮跳，怕这事儿没这么容易完。“酒庐那儿——”宝音开口，想同洛月诉诉心事。“那个蝶老板难为 了？！”洛月立刻倒吸一口冷气。七王爷在酒庐带走蝶宵华一事，沸沸扬扬，洛月因此知道蝶宵华也在酒庐。她一见 为酒庐为难，怎么立刻以为是蝶宵华呢？宝音静下来，问她：“我见过蝶老板，是不是？”洛月的表情很奇怪。 见过蝶老板，是当然的，为什么还问“是不是”？第九十三章 那夜笙蝶初相见（4） 宝音坐在床沿，拍拍旁边的褥子：“过来坐。”洛月便贴着宝音裙边，掇个杌子坐了。宝音携她：“上来。”洛月不肯上。宝音无奈道：“傻丫头，你坐那么低，难道要我弯腰勾头跟你说话儿？”洛月还是不敢上座，便另换了张高些的椅子，在宝音下首坐了。宝音一说话，她便立起身，弯腰在宝音嘴边听着。宝音捺她在椅子上，自己弯腰与她头凑头，低低道：“我那天差点病死，活是活转来，却落下病根。”洛月神色凄然：“嗯。”“你看出来了